论文部分内容阅读
目的 检测人胰腺癌Patu 8988细胞K-ras基因点突变形式,并观察针对该点突变的硫代反义寡核苷酸在体内外对Patu 8988细胞增殖和凋亡的影响.方法 顺序特异引物聚合酶链反应(PCR-SSP)法和基因测序检测Patu 8988细胞K-ras点突变形式,根据点突变形式设计并合成硫代反义寡核苷酸(K-ras mutation ASODN)作用Patu 8988,通过噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞生长情况;流式细胞术(FCM)检测K-ras蛋白表达和细胞凋亡;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测K-ras mRNA表达水平;以Patu 8988细胞建立裸鼠胰腺癌模型观察K-ras mutation ASODN在体内的抗肿瘤效果.结果 PCR-SSP法和基因测序检测表明Patu 8988细胞存在K-ras基因第12密码子点突变,其突变方式为GGT→GTT.体外实验表明K-ras mutation ASODN组较正义寡核苷酸(SODN)组、随机寡核苷酸(RODN)组和空白对照组可明显抑制Patu 8988细胞生长(P＜0.01),并呈时间-剂量效应关系;转染48 h后,K-ras mutation ASODN组的K-ras蛋白和mRNA表达程度较SODN组、RODN组和对照组均明显降低(P＜0.01),而细胞凋亡明显增多(P＜0.05).体内实验表明K-ras mutation ASODN较SODN组、RODN组和对照组能有效抑制BALB/C裸鼠人胰腺癌的生长(P＜0.01).结论 针对K-ras基因第12密码子点突变的反义寡核苷酸可明显抑制人胰腺癌Patu8988细胞生长,促进细胞凋亡,其机制可能是通过下调K-ras蛋白和K-ras mRNA表达而起作用。