酵母双杂交法对HBV表面抗原主蛋白候选结合蛋白的筛选

• 作 者: 周飞 任建林 卢雅丕 陈美娅 陈建民 刘明 施华秀 张波 董
• 机 构: 厦门大学附属中山医院消化内科,厦门大学消化疾病研究所,厦门市消化疾病中心,福建医科大学教学医院、厦门大学附属中山医院
• 出 处: 世界华人消化杂志
• 发表日期: 2008年13期
• 关键词: 乙型肝炎病毒 酵母双杂交技术 主蛋白 结合蛋白 聚合酶链式反应 Hepatitis B virusYeast-two hybrid techniqueSurfa
• 基金项目: 厦门市首批重大疾病科研攻关资助项目,No.WKZ0501厦门市卫生局医学科研立项资助项目,No.WSK0506厦门大学引进人才科研启动基金资助项目,No.Z03109福建省青年科技人才创新项目福建省高校新世纪人才创新资助项目 作者贡献分布：此课题设计由周飞,任建林,卢雅丕,陈美娅及董菁完成：研究过程由周飞,卢雅丕,陈美娅,施华秀及张波操作完成：研究所用新试剂及分析工具由陈建民及刘明提供：数据分析由

目的：自肝细胞cDNA文库中筛选与HBV主蛋白（SHBs）相互作用的蛋白基因,探讨主蛋白的生物学功能.方法：利用PCR扩增S主蛋白基因,定向克隆技术将靶基因克隆到pDEST32构建出S主蛋白的诱饵质粒;Westernblot方法验证转化诱饵质粒的酵母细胞表达SHBs;将诱饵质粒与人肝cDNA文库猎物质粒共同转化MaV203酵母细胞,在营养缺陷型培养基和X-gal上进行三重筛选阳性菌落,提取阳性酵母菌落的猎物质粒进行DNA测序;利用核苷酸数据库及生物信息学技术,对于筛选结果进行分析.结果：构建S主蛋白及肝文