【摘 要】
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目的 构建含有人乳头瘤病毒(HPV)6b和11型E6/E7基因的表达质粒和建立这些基因的转染细胞株.方法分别将HPV6bE6、HPV6bE7、HPV11F6和HPV11E7克隆于含绿色荧光蛋白基因的真核表达载体pcDNA3.1,经脂质体介导转染B16细胞,以G418筛选阳性克隆,荧光显微镜观察,RT-PCR鉴定mRNA转录.结果通过酶切鉴定和基因测序证实,构建质粒中目的基因片段序列完全正确.转染后
【机 构】
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310016,杭州,浙江大学医学院附属邵逸夫医院皮肤科,310016,杭州,浙江大学医学院附属邵逸夫医院皮肤科,浙江省中医学院实验动物中心,浙江省中医学院实验动物中心,浙江大学医学院附属第二医院肿瘤研
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目的 构建含有人乳头瘤病毒(HPV)6b和11型E6/E7基因的表达质粒和建立这些基因的转染细胞株.方法分别将HPV6bE6、HPV6bE7、HPV11F6和HPV11E7克隆于含绿色荧光蛋白基因的真核表达载体pcDNA3.1,经脂质体介导转染B16细胞,以G418筛选阳性克隆,荧光显微镜观察,RT-PCR鉴定mRNA转录.结果通过酶切鉴定和基因测序证实,构建质粒中目的基因片段序列完全正确.转染后荧光显微镜下可观测到B16细胞发出绿色荧光.以G418筛选的抗性细胞克隆提取RNA并经RT-PCR扩增出与目的基因大小一致的基因片段.结论建立的小鼠肿瘤细胞B16表达HPV6bE6、HPV6bE7、HPV11E6和HPV11E7基因.提示转染的细胞株可移植于小鼠,利于体内研究这些基因的生物学作用和免疫学机制。
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