【摘 要】
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目的 探索DDX60对日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus, JEV)复制的影响,并初步确定其影响机制.方法 以小鼠小胶质C8-B4细胞作为研究对象,对其进行JEV感染实验,以感染
【机 构】
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临朐县人民医院神经内一科 山东省临朐县,2626005
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目的 探索DDX60对日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus, JEV)复制的影响,并初步确定其影响机制.方法 以小鼠小胶质C8-B4细胞作为研究对象,对其进行JEV感染实验,以感染紫外灭活JEV细胞作为对照组,采用RT-qPCR(实时定量逆转录聚合酶链反应)测定感染后两组细胞中DDX60的表达,采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测两组细胞中免疫因子的水平.利用Lipofectamine 2000将DDX60敲降或过表达质粒转染入C8-B4细胞,对照组细胞转染空载质粒,采用RT-qPCR和Western印迹检测病毒RNA和蛋白水平变化,采用ELISA检测细胞中免疫因子表达水平的变化.结果 JEV组细胞中DDX60 mR-NA表达量显著低于正常细胞组(P<0.05, P<0.01); DDX60过表达组中病毒RNA水平和蛋白水平明显降低(P<0.05, P<0.01),而DDX60敲减组中其水平显著升高(P<0.01, P<0.001);与JEV失活组相比,JEV组细胞中免疫因子的水平显著提高(P <0.05, P <0.01, P <0.001);与正常对照组相比, DDX60敲减组中细胞免疫因子的表达水平明显下降(P<0.05),而DDX60过表达组中免疫因子的表达水平明显上升(P<0.05).结论 JEV感染可显著抑制C8-B4细胞中DDX60的表达,并促进细胞中免疫因子的释放;DDX60可增强感染病毒的C8-B4细胞中免疫因子的表达.综上,DDX60通过提高细胞的免疫反应进而抑制病毒的复制.
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