毕赤酵母表达重组hPK-5蛋白不均-性的鉴定

• 作 者: 李永红 饶春明 史新昌 陶磊 袁力勇 王军志
• 机 构: 中国药品生物制品检定所
• 出 处: 药物生物技术
• 发表日期: 2008年3期
• 关键词: hPK-5 毕赤酵母 重组蛋白 不均一性 Human plasminogen kringle 5 Pichia pastoris Recombinant p
• 基金项目: 基金项目：国家高技术研究发展计划（863计划）资助项目（2003AA2Z3480）.

对毕赤酵母表达重组人纤溶酶原Kringle 5（hPK-5）蛋白的不均一性进行了鉴定。应用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）法及分子排阻高效液相色谱（SEC-HPLC）和反相高效液相色谱（RP-HPLC）进行纯度分析。采用糖蛋白染色法鉴定是否为糖蛋白，以Edman降解法测定N端氨基酸，采用高效液相色谱-电喷雾四极杆飞行时间质谱（HPLC-ESI-QTOF-MS）联用技术测定蛋白质精确分子质量。结果表明：SDS-PAGE测定为单-条带，纯度大于95％，SEC-HPLC测定为单一色谱峰，纯度