传染性支气管炎病毒纤突蛋白S1基因的T／A载体克隆策略

• 作 者: 陈德胜 潘杰彦
• 机 构: 南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室,南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室
• 出 处: 畜牧与兽医
• 发表日期: 2000年5期
• 关键词: 传染性支气管炎病毒 S1基因 T/A载体 基因克隆 infectious bronchitis virus(IBV)S1 genegene cloningT v
• 基金项目: 国家自然科学基金重大项目 !(398932 90 2 2 )资助

参考Ｇｅｎｂａｎｋ收录的ＩＢＶ纤突蛋白（Ｓ１）基因序列，自行设计合成一对引物，对传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）江苏省地方分离毒株（ＪＳ／９５／０３）ＲＮＡ进行ＲＴ－ＰＣＲ扩增，产物经琼脂糖凝胶电泳分析，呈现一条１７１６ｂｐ的条带，将其克隆人Ｔ／Ａ质粒ｐＭＤ１８－Ｔ载体中，转化大肠杆菌ＪＭ１０９，挑选阳性克隆，用质粒少量提取法提取重组质粒，用ＥｃｏＲ Ⅱ和Ｈｉｎｄ Ⅲ双酶切对重组克隆质粒进行鉴定，然后