巨噬细胞诱导糖尿病肾病足细胞凋亡及其机制

• 作 者: 郭银凤 赵宇 姜彧滕 朱小东 刘必成 张晓良
• 机 构: 210009 南京，东南大学医学院，东南大学附属中大医院，江苏省肾脏病临床研究中心,210009 南京，东南大学医学院，东南大学附属中大医院，江苏省肾脏病临床研究中心,210009 南京，东南大学医学
• 出 处: 中华内分泌代谢杂志
• 发表日期: 2017年33期
• 关键词: 巨噬细胞 足细胞 细胞凋亡 糖尿病肾病

目的

探讨巨噬细胞在糖尿病肾病(DN)足细胞凋亡中的作用及其机制。

方法

体外培养小鼠巨噬细胞系(RAW264.7)，将其分为3组：正常葡萄糖组(NC)、甘露糖组(Man)、高葡萄糖组(HG)，并收集上述NC组巨噬细胞上清液(NC-CM)和HG组巨噬细胞上清液(HG-CM)。采用Western印迹和免疫荧光染色检测M1型巨噬细胞标志物iNOS和M2型巨噬细胞标志物MR表达，ELISA检测巨噬细胞上清液中TNF-α水平。体外培养小鼠永生系足细胞MPC5，将其分为以下几组：正常葡萄糖对照组(NC)、NC-CM组、HG-CM组、HG-CM＋ROS抑制剂组(HG-CM＋Tempo)、HG-CM＋p38MAPK抑制剂组(HG-CM＋SB203580)、HG-CM＋抗TNF-α中和抗体组(HG-CM＋TNF-α neutralizing antibody)、HG-CM＋中和抗体对照剂IgG组(HG-CM＋IgG)、重组小鼠TNF-α组。采用Annexin V-FITC/PI和Hoechst33342染色检测足细胞凋亡率，DCFH-DA染色检测足细胞ROS水平，Western印迹检测足细胞cleaved casepase-3、p38MAPK和p38MAPK磷酸化水平(p-p38MAPK)表达。

结果

(1)与对照组相比，HG组巨噬细胞iNOS表达明显增加，MR表达降低，呈促炎性M1型活化。(2)正常对照组与NC-CM组组间足细胞凋亡、cleaved casepase-3、ROS及p-p38MAPK表达差异无统计学意义。与对照组和NC-CM组相比，HG-CM组足细胞凋亡、cleaved casepase-3、ROS及p-p38MAPK明显增加。(3)与HG-CM组相比，HG-CM＋Tempo，HG-CM＋SB203580组足细胞凋亡和cleaved casepase-3表达明显降低。(4)巨噬细胞上清液HG-CM中TNF-α水平较NC-CM明显增加，且予以高糖刺激后，巨噬细胞TNF-α表达明显增多。(5)与HG-CM组相比，加入抗TNF-α中和抗体能显著减少足细胞凋亡，抑制cleaved casepase-3、ROS及p-p38MAPK表达。(6)单独TNF-α刺激明显上调足细胞凋亡，增加ROS和p-p38 MAPK表达。

结论

高糖状态下活化的M1型巨噬细胞释放TNF-α，激活足细胞ROS-p38MAPK信号通路进而诱导DN足细胞凋亡。