【摘 要】
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目的克隆人趋化因子MIP-3α基因,表达并初步纯化MIP-3α融合蛋白.方法从扁桃体中提取总RNA,再进行RT-PCR,扩增MIP-3α成熟蛋白基因,并在5'和3'分别添加NcoI和EcoRI酶
【机 构】
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第三军医大学附属西南医院实验研究中心,第三军医大学附属西南医院实验研究中心
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目的克隆人趋化因子MIP-3α基因,表达并初步纯化MIP-3α融合蛋白.方法从扁桃体中提取总RNA,再进行RT-PCR,扩增MIP-3α成熟蛋白基因,并在5'和3'分别添加NcoI和EcoRI酶切位点,通过这两个酶切位点重组于pET32a(+)载体上,转化E.coli.DH5α,筛选阳性克隆,酶切鉴定,DNA测序检测插入序列的正确性,缺失突变获得MIP-3α天然蛋白表达载体pET32a(+)/MIP-3α,SDS-PAGE分析其表达,Western blot验证融合蛋白.大量表达并初步纯化
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