天花粉蛋白突变体TCSKR173-174CG的构建、表达与纯化

• 作 者: 安群星 穆士杰 张献清 陈蕤 夏爱军 张清平 陈晨 雷迎峰
• 机 构: 第四军医大学西京医院输血科,第四军医大学微生物学教研室
• 出 处: 中国生物制品学杂志
• 发表日期: 2006年6期
• 关键词: 天花粉蛋白 定点突变 原核表达 Trichosanthin Site-directed mutation Prokaryotic expression
• 基金项目: 陕西省科技计划项目（2003K10G9）.

目的 构建天花粉蛋白（TCS）突变体基因，并进行表达及纯化。方法 应用计算机预测TCS分子上可能的抗原决定簇，并进行定点突变。以栝楼基因组DNA为模板，经PCR扩增突变基因，与pRSET-A表达载体连接，转化大肠杆菌BL21（DE3），经IPTG诱导表达，并对表达产物进行Ni-NTA层析纯化。结果 目的蛋白在大肠杆菌中获得高效可溶性表达。表达产物经纯化后，得到均一的TCS突变体蛋白。结论 已成功构建了TCS突变体基因，并获得高效表达。