高糖培养下人肾小球系膜细胞蛋白表达谱变化的研究

• 作 者: 都姝妍 范秋灵 王力宁 杨刚 姜奕
• 机 构: 110001,沈阳,中国医科大学附属第一医院中心实验室,110001,沈阳,中国医科大学附属第一医院中心实验室,110001,沈阳,中国医科大学附属第一医院中心实验室,110001,沈阳,中国医科大学
• 出 处: 中华肾脏病杂志
• 发表日期: 2010年26期
• 关键词: 蛋白质组学 肾小球系膜细胞 电泳 凝胶 双向 高糖

目的 利用比较蛋白质组学双向电泳技术研究体系,观察高糖培养下人肾小球系膜细胞(HMC)蛋白表达谱的变化.方法 人肾小球系膜细胞分为高糖培养组(30 mmol/L)和正常糖组(5 mmol/L),培养48 h后收集细胞,提取总蛋白,以DIGE饱和荧光标记,双向荧光差异凝胶电泳.应用Typhoon多功能成像系统扫描凝胶,DeCyder 2-D差异分析软件进行图像分析,寻找差异表达蛋白质.采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)和蛋白质数据库检索鉴定差异蛋白.结果 通过DeCyder 2-D差异分析软件,发现正常糖组和高糖培养组之间差异大于1.5倍的蛋白质斑点147个,对其中96个差异蛋白质斑点进行了肽质指纹图分析,鉴定出37种蛋白质.其中磷脂酰乙醇胺结合蛋白1(PEBP-1)、粒溶素、ATP合成酶H+转运线粒体F0复合体亚基F2仅在高糖组表达.高糖刺激后表达上调的蛋白质有24个,包括嗜酸细胞阳离子蛋白、RGS膜相互作用蛋白16(MIR16)、肽酰-脯氨酰-顺反式异构酶、disks large homolog DLG2、早发性乳腺癌2(BRCA2)、儿茶酚-邻-甲基转移酶等;表达下调的蛋白有5个,包括O-GlcNAc transferase-interacting protein 106 000 isoform 1、proteasome beta 6 subunit precursor、NEFA-interacting nuclear protein NIP30等.结论 高糖培养下HMC内147种蛋白质的表达发生变化.这些蛋白质广泛参与高糖对HMC的细胞骨架、糖代谢、细胞分裂、基因转录、信号转导、磷酸化、细胞增殖、凋亡等的调节.深入分析这些差异表达蛋白的功能与调控,有望为阐明糖尿病肾病的发病机制提供重要的实验依据。