【摘 要】
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细菌人工染色体(BAC)最多可克隆300 kb的DNA片段且遗传特性稳定,是目前常用的克隆载体.但如何高效提取BAC装载的大基因及其大基因操作等方面还需不断的摸索完善.本研究采用超大基因质粒提取法从BAC中提取出165 kb的大基因,经Nanodrop测定浓度、酶切、脉冲场电泳,表明获得目标基因;将获得的大基因质粒转染猪胎儿成纤维细胞,经抗性筛选,获得细胞克隆;克隆细胞经PCR检测,证明大基因质粒被完整地导入猪胎儿成纤维细胞.本研究为构建细菌人工染色体提够基础数据.
【机 构】
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重庆市畜牧科学院,重庆,402460;重庆市畜牧科学院,农业农村部养猪科学重点实验室,重庆,402460;重庆市畜牧科学院,养猪科学重庆市市级重点实验室,重庆,402460;重庆市畜牧科学院,重庆,4
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细菌人工染色体(BAC)最多可克隆300 kb的DNA片段且遗传特性稳定,是目前常用的克隆载体.但如何高效提取BAC装载的大基因及其大基因操作等方面还需不断的摸索完善.本研究采用超大基因质粒提取法从BAC中提取出165 kb的大基因,经Nanodrop测定浓度、酶切、脉冲场电泳,表明获得目标基因;将获得的大基因质粒转染猪胎儿成纤维细胞,经抗性筛选,获得细胞克隆;克隆细胞经PCR检测,证明大基因质粒被完整地导入猪胎儿成纤维细胞.本研究为构建细菌人工染色体提够基础数据.
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