肝癌胰岛素样生长因子-I受体异常表达及其转录干预对裸鼠移植瘤的抑制效果

• 作 者: 姚敏 严晓娣 蔡胤 顾娟娟 杨绪莉 潘刘翃 王理 姚登福
• 机 构: 226001 江苏省南通市，南通大学附属医院临床医学研究中心 医学院免疫教研室,226001 江苏省南通市，南通大学附属医院临床医学研究中心 医学院免疫教研室,226001 江苏省南通市，南通大学附属
• 出 处: 中华肝脏病杂志
• 发表日期: 2016年24期
• 关键词: 癌 肝细胞 IGF-I型受体 基因沉默

目的

分析肝癌胰岛素样生长因子-I受体(IGF-IR)表达并观察干预基因转录对裸鼠移植瘤的抑制作用。

方法

对40例原发性肝癌患者，手术后分别留取癌灶、癌周(距癌灶边缘2 cm)和远癌肝组织(距癌灶边缘5 cm)各40份，约200 mg，除部分作病理学检查外，其余置-85℃保存。4～6周龄体质量（18～20）g BALB/C裸鼠18只，雌雄各半，随机分为对照组6只、阴性对照组6只、干扰组6只，于无特定病原体条件下饲养。细胞株以含10%胎牛血清的二甲基亚砜完全培养基于37℃含CO₂培养箱培养。细胞接种后，融合度达90%时，将shRNA分为干扰组、阴性对照和未处理对照组，以PolyJet^TM转染试剂转染至肝癌细胞，经G418筛选，得到稳定转染细胞克隆，用于体内研究。用免疫组织化学法、Western blot或荧光定量PCR分析人肝癌组织、肝癌细胞株IGF-IR表达；构建IGF-IR短发夹型RNA (shRNA)真核表达质粒并筛选最有效序列；转染至肝癌PLC/PRF/5细胞，CCK-8法分析细胞增殖变化；经G418筛选稳定株接种裸鼠皮下成瘤,绘制肿瘤生长曲线及组织学检查。统计数据用Graphpad Prism 5.0和SPSS18.0软件进行绘图和分析，多个样本均数间比较先行方差检验和q检验，两样本均数比较采用t检验，样本率间比较采用χ²分析或Fisher确切概率法，表达强度以等级相关分析。

结果

IGF-IR阳性率肝癌组为82.5%、癌周组为42.5%、远癌组为10.0%，癌周组、远癌组与肝癌组比较，χ² = 13.653和χ² = 42.290，P值均< 0.01；其表达强度，肝癌组显著高于癌周组(Z = 4.771，P < 0.01)和远癌组(Z = 6.579，P < 0.01)。肝L02细胞未见IGF-IR明显表达，肝癌PLC/PRF/5细胞IGF-IR呈强表达,约为Bel-7404细胞的4倍、HepG2细胞的5倍；以干扰效果最佳的shRNA4转染PLC/PRF/5细胞，在72 h时癌细胞生长平均抑制率为63.9%，IGF-IR在转录水平平均抑制59.6%；癌细胞增殖发生G₁期阻滞，其凋亡率显著增高。裸鼠皮下肝癌移植瘤，干预组瘤体[（143±24）mm³]生长速度明显慢于空白对照组[（372±46）mm³]，t = 10.776，P < 0.01，或阴性对照组[(350±50) mm³]，t = 9.142，P < 0.01；干预组IGF-IR表达下调，显著低于空白对照组（t = 11.184，P < 0.01）及阴性对照组（t = 9.450，P < 0.01）。

结论

干预IGF-IR基因转录可有效抑制裸鼠移植瘤生长，IGF-IR基因有望成为肝癌治疗新的潜在靶目标。