生信分析联合实验验证探究小金丸治疗乳腺癌骨转移的机制

来源 :中国实验方剂学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zj1280
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目的:通过细胞实验及生信分析探究小金丸在乳腺癌骨转移中的作用机制.方法:采用细胞增殖与活性检测(CCK-8)法检测细胞活力,观察小金丸对MCF-7细胞活力的抑制作用.网络药理学及分子对接2种生信分析手段预测小金丸作用于乳腺癌骨转移的主要成分及靶点.小金丸的活性成分及靶点利用中药系统药理学数据库和分析平台(TCSMP)等传统草药数据库和SwissTargetPrediction数据库筛选,乳腺癌骨转移相关靶点通过GeneCards和DisGeNET数据库筛选,STRING平台构建蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络,DAVID在线分析基因本体(GO)富集分析功能和京都基因和基因组百科全书(KEGG)富集分析.小金丸主要活性成分-乳腺癌骨转移疾病靶点-通路网络利用Cytoscape 3.7.2构建.利用AutoDock4软件对接验证分子.蛋白免疫印迹法(Westem blot)检测基质金属蛋白酶-9(MMP-9),缺氧诱导因子1α(HIF1A)和雄激素受体(AR)蛋白表达.结果:小金丸能抑制MCF-7细胞活力,通过氧化还原,蛋白质自磷酸化等过程作用于乳腺癌骨转移.KEGG富集分析得HIF-1,血管内皮生长因子(VEGF)和磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)等信号通路发挥作用.分子对接验证结果显示桉树素等有效成分能与AR,MMP-9等稳定结合.蛋白免疫印迹提示,小金丸剂量依赖性抑制MCF-7细胞中MMP-9和HIF1A蛋白的表达.结论:小金丸通过HIF,VEGF等相关信号通路作用于AR,MMP-9等主要靶点蛋白,从而改善肿瘤微环境缺氧,抑制血管生成,以及降低细胞侵袭性和细胞活力.
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