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【摘 要】本实验对复方抗感灵颗粒的质量标准进行研究。含量测定方法：采用奥泰公司C18色谱柱（220mm×4.6mm，5μm），乙腈-水-冰醋酸（12∶88：0.05）为流动相，检测波长为327nm，流速为1.0ml/min，柱温为30℃；鉴别方法：硅胶H1%cmC薄层板，以氯仿一甲醇（20∶1）为展开剂，喷以10%硫酸，于110℃烤10分钟， 供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的灰黑色斑点.或碘熏后，呈相同的黄棕色斑点。结论：本法简便、准确，可作为复方抗感灵颗粒的质量标准。
【关键词】复方抗感灵颗粒；质量标准；研究
复方抗感灵颗粒由金银花、连翘、麻黄、决明子、苦杏仁等组成。复方抗感灵颗粒具有益气固表、清热解毒、宣散风热等功效。金银花为忍冬科木质藤本植物忍冬的花蕾，主要化学成分为绿原酸、异绿原酸、木犀草素、环己六醇、黄酮类、肌醇、皂苷、鞣质等。金银花具有广谱抗菌作用，对金黄色葡萄球菌、痢疾杆菌等致病菌有较强的抑制作用，对钩端螺旋体、流感病毒及致病霉菌等多种病原微生物亦有抑制作用[1-2]。绿原酸是金银花抗菌的主要成分。连翘为木犀科植物连翘的果实，具有清热解毒的作用。连翘含有连翘酚（Forsythol）、对聚伞花烯（p-Cymene）、β-水芹烯（β-Phellandrene）、连翘甙元（Phillygenin）、白桦脂酸（Betulinic acid）、熊果酸（Ursolic acid）、香叶烯（Myrcene）、β-罗勒烯（β-Ocimene）、α-萜品醇（α-Terpineol）、去甲拉帕醇等。本实验对复方抗感灵颗粒的质量标准进行研究。
1.仪器与试药
（1）仪器：超声波震荡器清洗机（广州市吉普超声波电子设备有限公司）； 电子分析天平（上海恒刚仪器仪表有限公司）；高效液相色谱仪（天津市兰博实验仪器设备有限公司）；UV2600紫外可见分光光度计（上海天美科学仪器有限公司）；MOLPW医药生物行业用超纯水系统（上海摩勒科学仪器有限公司）；DHG-9240A电热恒温鼓风干燥箱（上海和呈仪器制造有限公司）；SLGH超深度高精度恒温槽（南京顺流仪器有限公司）；L530-多管架自动平衡离心机（湘仪离心机仪器有限公司）。
（2）色谱柱：奥泰公司C18色谱柱（220mm×4.6mm，5μm）。
（3）对照品：绿原酸。
（4）试剂：甲醇（湖北巨胜科技有限公司）、乙腈（上海海曲化工有限公司）、氯仿（北京翰隆达科技发展有限公司）、硫酸（上海海曲化工有限公司）、冰醋酸（湖北巨胜科技有限公司）。
（5）试药：复方抗感灵颗粒。
2.测定方法确定
2.1色谱条件
依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下[3-10]。流动相：乙腈-水-冰醋酸（12∶88：0.05）为流动相，检测波长：327nm，流速：1.0ml·min-1。柱温：30℃。理论板数按绿原酸峰计算应不得低于2000。
2.2对照品溶液的制备
精密称取绿原酸对照品适量，置容量瓶中，加流动相制成每1mL含20μg的溶液，即得。
2.3供试品溶液的制备
取复方抗感灵颗粒适量，研细，精密称定，加20毫升流动相超声提取30分钟，过滤，滤液转移至50ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，即得。
2.4专属性试验
取连翘、麻黃、决明子、苦杏仁等药材按样品制备工艺制成阴性对照样品，按上述实验方法检测，结果阴性试验没有干扰，表明本方法专属性良好。
2.5精密度试验
取对照品溶液按上述色谱条件，精密吸取20μl，连续进样6次，记录峰面积。结果，RSD=0.63%，表明本方法精密度良好。
2.6对照品的线性考察
精密称取适量绿原酸对照品，加入流动相溶液使溶解分别配制成每毫升含5、10、20、30、40、50、60微克的溶液。分别精密上述溶液吸取10μL，注人液相色谱仪，依照2.1项下的色谱条件测定，记录色谱峰。以峰面积（Y）为纵坐标，对照品进样量（X）为横坐标，绘制标准曲线。结果表明，绿原酸在5～60μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。
2.7重现性试验
称取同一批的复方抗感灵颗粒样品6份，按测定方法项下的方法制备供试品溶液，测定含量，并计算样品的RSD值，结果RSD为0.65%，结果表明此方法的重现性良好。
2.8准确度试验
取对照品适量分别精密加入复方抗感灵颗粒中，按含量测定进行测定，计算回收率为99.5%，RSD为0.81%。
2.9样品含量测定
依照上述含量测定方法，再按外标法以峰面积计算样品的含量，结果三批样品的含量分别为5.1mg/g、5.2mg/g、5.1mg/g。
3.鉴别
取复方抗感灵颗粒适量（约相当于连翘药材3g），加水20ml，超声溶解，加6mol/L盐酸，调pH值至2，即用乙醚20ml提取， 回收乙醚后的残渣，再溶于乙醇0.5ml中，作为供试品溶液.取连翘药材3g按上述方法制成对照品溶液。取金银花、麻黄、决明子、苦杏仁等药材按样品制备工艺制成阴性对照样品，按上述方法制成阴性对照样品。吸取上述溶液，分别点于同一硅胶H 1%cmC薄层板上，以氯仿一甲醇（20∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸，于110℃烤10分钟， 供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的灰黑色斑点.或碘熏后，呈相同的黄棕色斑点，而阴性对照无干扰。
4.结论
本实验分离效果好、方法简便、快捷、准确、专属性好，可用于复方抗感灵颗粒中绿原酸的含量测定。样品与连翘对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰。该鉴别方法专属性强，操作简单，可用于复方抗感灵颗粒中连翘的鉴别。
【参考文献】
[1]邢俊波，李会军，李萍，刘云.忍冬花蕾化学成分研究[J].中国新药杂志，2002（11）.
[2]冯卫生，陈欣，郑晓珂，张春磊，李丹丹.金银花化学成分研究[J].中国药学杂志，2011（05）.
[3]林丽美，刘菊妍，王燕，许招懂，王智民.RP-HPLC法测定金银花中绿原酸的含量[J].中国实验方剂学杂志，2009（09）.
[4]胡生俊，徐岳鑫，董赛文，张雪峰.高效液相色谱法测定复方金银花颗粒中绿原酸含量[J].中国药业，2011（03）.
[5]张元元，李进，陈涛，李凤丽.高效液相色谱法同时测定金银花中绿原酸和木犀草苷的含量[J].天津中医药大学学报，2011（02）.
[6]黄雄，李萍，张重义，李会军.HPLC同时分析金银花中绿原酸和黄酮类成分的方法建立及其应用[J].中国药学杂志，2005（10）.
[7]但春，林之蔚，雷泞菲，严雪峰，郭程飞，庄贺.四川南江金银花中绿原酸含量的测定[J].食品研究与开发，2010（08）.
[8]宋平顺，卫玉玲，陶耀武，丁永辉.不同产地金银花中绿原酸和木犀草苷含量的HPLC法测定[J].甘肃中医学院学报，2008（05）.
[9]金智利，袁文婧.高效液相色谱法测定金银花连翘提取物中绿原酸、咖啡酸的含量[J].黑龙江医药，2011（01）.
[10]时军波，徐娜，刘长安，李福伟，吴晓峰.金银花不同部位中绿原酸和木犀草苷含量的测定[J].化学分析计量，2010（06）.
【关键词】复方抗感灵颗粒；质量标准；研究
复方抗感灵颗粒由金银花、连翘、麻黄、决明子、苦杏仁等组成。复方抗感灵颗粒具有益气固表、清热解毒、宣散风热等功效。金银花为忍冬科木质藤本植物忍冬的花蕾，主要化学成分为绿原酸、异绿原酸、木犀草素、环己六醇、黄酮类、肌醇、皂苷、鞣质等。金银花具有广谱抗菌作用，对金黄色葡萄球菌、痢疾杆菌等致病菌有较强的抑制作用，对钩端螺旋体、流感病毒及致病霉菌等多种病原微生物亦有抑制作用[1-2]。绿原酸是金银花抗菌的主要成分。连翘为木犀科植物连翘的果实，具有清热解毒的作用。连翘含有连翘酚（Forsythol）、对聚伞花烯（p-Cymene）、β-水芹烯（β-Phellandrene）、连翘甙元（Phillygenin）、白桦脂酸（Betulinic acid）、熊果酸（Ursolic acid）、香叶烯（Myrcene）、β-罗勒烯（β-Ocimene）、α-萜品醇（α-Terpineol）、去甲拉帕醇等。本实验对复方抗感灵颗粒的质量标准进行研究。
1.仪器与试药
（1）仪器：超声波震荡器清洗机（广州市吉普超声波电子设备有限公司）； 电子分析天平（上海恒刚仪器仪表有限公司）；高效液相色谱仪（天津市兰博实验仪器设备有限公司）；UV2600紫外可见分光光度计（上海天美科学仪器有限公司）；MOLPW医药生物行业用超纯水系统（上海摩勒科学仪器有限公司）；DHG-9240A电热恒温鼓风干燥箱（上海和呈仪器制造有限公司）；SLGH超深度高精度恒温槽（南京顺流仪器有限公司）；L530-多管架自动平衡离心机（湘仪离心机仪器有限公司）。
（2）色谱柱：奥泰公司C18色谱柱（220mm×4.6mm，5μm）。
（3）对照品：绿原酸。
（4）试剂：甲醇（湖北巨胜科技有限公司）、乙腈（上海海曲化工有限公司）、氯仿（北京翰隆达科技发展有限公司）、硫酸（上海海曲化工有限公司）、冰醋酸（湖北巨胜科技有限公司）。
（5）试药：复方抗感灵颗粒。
2.测定方法确定
2.1色谱条件
依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下[3-10]。流动相：乙腈-水-冰醋酸（12∶88：0.05）为流动相，检测波长：327nm，流速：1.0ml·min-1。柱温：30℃。理论板数按绿原酸峰计算应不得低于2000。
2.2对照品溶液的制备
精密称取绿原酸对照品适量，置容量瓶中，加流动相制成每1mL含20μg的溶液，即得。
2.3供试品溶液的制备
取复方抗感灵颗粒适量，研细，精密称定，加20毫升流动相超声提取30分钟，过滤，滤液转移至50ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，即得。
2.4专属性试验
取连翘、麻黃、决明子、苦杏仁等药材按样品制备工艺制成阴性对照样品，按上述实验方法检测，结果阴性试验没有干扰，表明本方法专属性良好。
2.5精密度试验
取对照品溶液按上述色谱条件，精密吸取20μl，连续进样6次，记录峰面积。结果，RSD=0.63%，表明本方法精密度良好。
2.6对照品的线性考察
精密称取适量绿原酸对照品，加入流动相溶液使溶解分别配制成每毫升含5、10、20、30、40、50、60微克的溶液。分别精密上述溶液吸取10μL，注人液相色谱仪，依照2.1项下的色谱条件测定，记录色谱峰。以峰面积（Y）为纵坐标，对照品进样量（X）为横坐标，绘制标准曲线。结果表明，绿原酸在5～60μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。
2.7重现性试验
称取同一批的复方抗感灵颗粒样品6份，按测定方法项下的方法制备供试品溶液，测定含量，并计算样品的RSD值，结果RSD为0.65%，结果表明此方法的重现性良好。
2.8准确度试验
取对照品适量分别精密加入复方抗感灵颗粒中，按含量测定进行测定，计算回收率为99.5%，RSD为0.81%。
2.9样品含量测定
依照上述含量测定方法，再按外标法以峰面积计算样品的含量，结果三批样品的含量分别为5.1mg/g、5.2mg/g、5.1mg/g。
3.鉴别
取复方抗感灵颗粒适量（约相当于连翘药材3g），加水20ml，超声溶解，加6mol/L盐酸，调pH值至2，即用乙醚20ml提取， 回收乙醚后的残渣，再溶于乙醇0.5ml中，作为供试品溶液.取连翘药材3g按上述方法制成对照品溶液。取金银花、麻黄、决明子、苦杏仁等药材按样品制备工艺制成阴性对照样品，按上述方法制成阴性对照样品。吸取上述溶液，分别点于同一硅胶H 1%cmC薄层板上，以氯仿一甲醇（20∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸，于110℃烤10分钟， 供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的灰黑色斑点.或碘熏后，呈相同的黄棕色斑点，而阴性对照无干扰。
4.结论
本实验分离效果好、方法简便、快捷、准确、专属性好，可用于复方抗感灵颗粒中绿原酸的含量测定。样品与连翘对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰。该鉴别方法专属性强，操作简单，可用于复方抗感灵颗粒中连翘的鉴别。
【参考文献】
[1]邢俊波，李会军，李萍，刘云.忍冬花蕾化学成分研究[J].中国新药杂志，2002（11）.
[2]冯卫生，陈欣，郑晓珂，张春磊，李丹丹.金银花化学成分研究[J].中国药学杂志，2011（05）.
[3]林丽美，刘菊妍，王燕，许招懂，王智民.RP-HPLC法测定金银花中绿原酸的含量[J].中国实验方剂学杂志，2009（09）.
[4]胡生俊，徐岳鑫，董赛文，张雪峰.高效液相色谱法测定复方金银花颗粒中绿原酸含量[J].中国药业，2011（03）.
[5]张元元，李进，陈涛，李凤丽.高效液相色谱法同时测定金银花中绿原酸和木犀草苷的含量[J].天津中医药大学学报，2011（02）.
[6]黄雄，李萍，张重义，李会军.HPLC同时分析金银花中绿原酸和黄酮类成分的方法建立及其应用[J].中国药学杂志，2005（10）.
[7]但春，林之蔚，雷泞菲，严雪峰，郭程飞，庄贺.四川南江金银花中绿原酸含量的测定[J].食品研究与开发，2010（08）.
[8]宋平顺，卫玉玲，陶耀武，丁永辉.不同产地金银花中绿原酸和木犀草苷含量的HPLC法测定[J].甘肃中医学院学报，2008（05）.
[9]金智利，袁文婧.高效液相色谱法测定金银花连翘提取物中绿原酸、咖啡酸的含量[J].黑龙江医药，2011（01）.
[10]时军波，徐娜，刘长安，李福伟，吴晓峰.金银花不同部位中绿原酸和木犀草苷含量的测定[J].化学分析计量，2010（06）.