肝癌细胞Huh7与SMMC-7721抗ROS能力对比与机制初步研究

• 作 者: 李高峰 徐伟 李培培 李清华 吴东
• 机 构: 第二军医大学东方肝胆外科医院肝外一科,苏州市中西医结合医院,福建医科大学第一临床学院,苏州大学研究生院,
• 出 处: 重庆医科大学学报
• 发表日期: 2017年07期
• 关键词: 肝癌 活性氧类物质 肿瘤干性分子 DNA修复基因 ROS清除基因

目的:比较Huh7、SMMC-7721细胞系抵抗外源性活性氧类（reactive oxygen species,ROS）物质能力的不同,并初步探究肝癌细胞抗ROS的机制。方法:不同浓度的H₂O₂处理Huh7和SMMC-7721细胞后,比较两者凋亡、坏死的差异,检测细胞内ROS、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、还原型谷胱甘肽（reduced glutathione,GSH）含量及细胞活性、肿瘤干性分子、ROS清除酶基因和DNA修复酶基因的表达变化。结果:同浓度H₂O₂处理后,SMMC-7721细胞凋亡和坏死数目多于Huh7细胞,其细胞活性明显低于Huh7细胞,在1μmol/m L H₂O₂浓度组,计数1 500个细胞内SMMC-7721与Huh7细胞凋亡与坏死数目分别为（841.7±78.7）个、（169.7±76.1）个（t=10.638,P=0.000）;SMMC-7721与Huh7细胞活性分别为（0.21±0.02）、（0.74±0.14）（t=6.478,P=0.022）。肝癌细胞内ROS的水平随H₂O₂浓度增加呈升高趋势,但Huh7细胞内明显低于SMMC-7721细胞,在1μmol/m L H₂O₂浓度组,SMMC-7721与Huh7细胞细胞内ROS水平分别为（128 793±1 158）、（103 455±1 665）（t=21.639,P=0.000）;Huh7细胞比SMMC-7721细胞有更高含量的GSH、SOD,并且在H₂O₂处理后GSH、SOD下降趋势缓于SMMC-7721细胞,在1μmol/m L H₂O₂浓度组,SMMC-7721与Huh7细胞内GSH含量分别为（32.85±4.47）mg/g prot、（106.60±6.83）mg/g prot（t=15.655,P=0.000）,SMMC-7721与Huh7细胞内SOD含量分别为（19.22±2.93）U/mg prot、（23.57±4.85）U/mg prot（t=1.332,P=0.254）;整体上肝癌细胞内GSH、SOD的变化早于细胞内ROS和细胞活性的变化;Western blot提示Huh7细胞比SMMC-7721细胞高表达肿瘤干性分子CD133、Bmi-1、ROS清除酶基因SOD2和DNA修复基因Rad51。结论:Huh7比SMMC-7721有更强的抗ROS能力,相对高表达CD133、Bmi-1、SOD2及Rad51,这些分子可能参与了肝癌细胞抗ROS的过程,且可能通过细胞内GSH、SOD直接发挥作用。