Pyrococcus furiosus小分子热休克蛋白Pfu-sHSP的克隆达和纯化

• 作 者: 陈华友 谭小力 张志燕 褚仲梅
• 机 构: 江苏大学,生命科学研究院,江苏,镇江,212013中国科学院,上海生命科学研究院,上海,200233;江苏大学,生命科学研究院,江苏,镇江,212013;中国科学院,上海生命科学研究院,上海,2002
• 出 处: 信阳师范学院学报(自然科学版)
• 发表日期: 2009年1期
• 关键词: 小分子热休克蛋白 Pyrococcus furosus 分子伴侣

用PCR扩增嗜高温菌Pyrococctu furiosus的小分子热休克蛋白基因后,克隆于质粒pT7473中.该小分子热休克蛋白Pfu-sHSP含有较多的稀有密码子,在大肠杆菌BL21(DE),几乎无表达,而在带有大肠杆菌稀有密码子AGA(arg)AGG(arg),AUA(ile)和CUA(leu)的BL21-Codonplus(DE)3-RIL中能大量表迭.大量表达Pfu-sHSP蛋白的细胞用超声波破碎后,离心沉淀用85℃水浴20 min,再离心,上清液再以Q Sepha-rose Fast Flow阴离子交换和S-200凝胶过滤层析进一步纯化,可以得到90%以上的蛋白.