【摘 要】
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Atsttrin是颗粒蛋白前体(Progranulin,PGRN)的截断突变体,具有比PGRN更强的TNFα受体拮抗能力,从而可产生更显著的抗炎治疗效果.为了筛选出高表达Atsttrin原核表达系统,致力
【机 构】
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工业发酵微生物教育部重点实验室,天津市工业微生物重点实验室,天津科技大学生物工程学院,天津300457;武汉科技大学生物医学研究院,湖北武汉430000
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Atsttrin是颗粒蛋白前体(Progranulin,PGRN)的截断突变体,具有比PGRN更强的TNFα受体拮抗能力,从而可产生更显著的抗炎治疗效果.为了筛选出高表达Atsttrin原核表达系统,致力于为抗炎新药的开发奠定工作基础,故开展该研究.研究以人血管内皮细胞(HUVEC)的cDNA文库为模板,PCR克隆得到pgrn基因,进而通过重叠PCR成功扩增获得atsttrin目的基因.分别将atsttrin插入到pET-22b(+)、pGEX-6p-3和pET-40b(+)3个不同的表达载体上,并转化大肠杆菌BL21 (DE3)、Rosetta(DE3)得到6株表达菌株.通过测定各菌株蛋白表达量,E coli BL21(DE3)/pGEX-Atsttrin菌株中目的蛋白的表达水平最高.为进一步提高表达量,对诱导温度、诱导时期、诱导剂浓度和诱导时间进行了优化.实验结果表明诱导表达最佳条件为37℃培养到A600为1.0时加入终浓度为3 mmol/L的乳糖,30℃诱导培养12 h,在此条件下进行5L发酵罐诱导10 h后重组蛋白产量为550 mg/L.作者成功建立了Atsttrin的大肠杆菌表达系统,并对其表达条件进行了优化,从而为相关药物的开发奠定了工作基础.
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