微RNA-124a靶向AKT2基因调控类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖迁移和侵袭的作用机制研究

• 作 者: 和雅 王燕 卢华清 任丽丽 孟洋
• 机 构: 郑州大学第五附属医院风湿免疫科 450000,郑州大学第五附属医院风湿免疫科 450000,郑州大学第五附属医院风湿免疫科 450000,郑州大学第五附属医院风湿免疫科 450000,郑州大学第五附属
• 出 处: 中华风湿病学杂志
• 发表日期: 2019年23期
• 关键词: 关节炎 类风湿 成纤维细胞 滑膜 增殖 迁移 侵袭 miR-124a

目的

研究微RNA（miR）-124a对RA滑膜成纤维细胞（RASFs）增殖、迁移和侵袭的影响和潜在的分子机制。

方法

从滑膜组织分离培养RASFs，实时荧光定量反转录（qRT）-PCR检测RASFs中AKT2 mRNA和miR-124a的表达，蛋白质印迹法检测AKT2蛋白表达水平，RASFs转染miR-124a，anti-miR-124a，si-AKT2或pcDNA-AKT2以上调或下调miR-124a和AKT2蛋白表达水平，细胞分为正常滑膜组织组，对照组，miR-con组，miR-124a，si-con组，si-AKT2组，miR-124a+pcDNA组，miR-124a+pcDNA-AKT2组。四氮唑蓝（MTT）法测定RASFs细胞增殖活性，Transwell实验检测细胞迁移和侵袭细胞数，双荧光素酶报告系统验证miR-124a与AKT2之间的调控关系。采用独立样本t检验、单因素方差分析（方差齐）进行统计学分析。

结果

①与正常滑膜组织组相比，RA患者滑膜组织中的miR-124a表达量（0.92±0.19）显著下降（t=5.788，P<0.01），AKT2 mRNA表达量（3.15±0.63）显著升高（t=-3.486，P=0.025），AKT2蛋白表达量（2.09±0.64）显著升高（t=-2.959，P=0.042）。②与对照组、miR-con组相比，miR-124a组的miR-124a表达量（4.17±0.46）显著上升（F=131.830，P<0.01），迁移细胞数（34±6）显著下降，侵袭细胞数（14.5±3.1）显著下降（F₁=35.788，F₂=27.211，P<0.01）。③与miR-con组（1.02±0.18）相比，miR-124a组的野生型WT-AKT2的萤火虫荧光素酶相对活性（0.31±0.11）显著下降（t=5.830，P<0.01）。④与对照组、si-con组相比，si-AKT2组的AKT2蛋白表达量（0.97±0.03）显著下降（F=128.056，P<0.01），迁移细胞数（32±4）显著下降，侵袭细胞数（18.6±2.2）显著下降（F₁=70.082，F₂=36.524，P<0.01）。⑤与miR-con组相比，miR-124a组的AKT2蛋白表达量（0.21±0.03）显著下降；与miR-124a+pcDNA组相比，miR-124a+pcDNA-AKT2组的AKT2蛋白表达量（0.51±0.06）显著上升（F=52.487，P<0.01）。⑥与miR-con组相比，miR-124a组RASFs迁移细胞数（30.5±4.6）和侵袭细胞数（12.5±1.8）显著下降；与miR-124a+pcDNA组相比，miR-124a+pcDNA-AKT2组的RASFs迁移细胞数（71±4）和侵袭细胞数（26.4±4.5）显著上升（F₁=30.957，F₂=49.960，P<0.01）。

结论

miR-124a通过靶向AKT2基因表达调控RASFs细胞增殖、迁移和侵袭，miR-124a有望成为RA分子诊断和治疗的靶点。