论文部分内容阅读
目的 构建针对人基质金属蛋白酶-1(MMP-1)基因的特异性短发卡RNA(shRNA)真核表达载体,并观察其在人骨肉瘤细胞MG63中对MMP-1基因表达的抑制作用.方法 培养骨肉瘤细胞MG63,根据MMP-1基因cDNA编码序列,设计并合成针对MMP-1基因的特异性RNA干扰片断,将其克隆入pSilencer 3.0-H1 neo质粒,构建MMP-1基因shRNA真核表达载体siRNAMMP-1.与阴性对照质粒分别转染MG63细胞,G418筛选稳定转染的细胞系.采用RT-PCR、Western blot检测MMP-1 mRNA和蛋白的表达水平,同时进行体外侵袭试验.结果 成功构建了MMP-1基因shRNA真核表达载体siRNA MMP-1.获得了稳定转染siRNA MMP-1载体和阴性对照载体siRNA neg的细胞系,并发现MG63/siRNA MMP-1细胞MMP-1mRNA和蛋白表达均受到明显抑制,细胞侵袭能力也显著下降.结论 特异性shRNA能够明显抑制MMP-1基因在MG63细胞中的表达,这为进一步研究MMP-1在MG63细胞中的生物学功能和作用机制奠定了实验基础。