【摘 要】
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目的 制备抗乙型脑炎病毒（Japanese encephalitis virus,JEV）非结构蛋白NS1多克隆抗体和单克隆抗体，并建立针对JEV的抗原定量双抗体夹心ELISA检测方法，用于疫苗研制中抗原定量及质量控制。方法 原核表达制备重组蛋白JEV-NS1，纯化后免疫BALB/c小鼠和家兔，制备兔多克隆抗体和鼠单克隆抗体。分别以兔多抗作为捕获抗体、HRP-JEns1C1鼠单抗作为检测抗体和鼠单
【机 构】
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武汉生物制品研究所有限责任公司轮状病毒疫苗室
【基金项目】
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国家重大新药创制科技重大专项（2013ZX09402302）；
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目的 制备抗乙型脑炎病毒（Japanese encephalitis virus,JEV）非结构蛋白NS1多克隆抗体和单克隆抗体，并建立针对JEV的抗原定量双抗体夹心ELISA检测方法，用于疫苗研制中抗原定量及质量控制。方法 原核表达制备重组蛋白JEV-NS1，纯化后免疫BALB/c小鼠和家兔，制备兔多克隆抗体和鼠单克隆抗体。分别以兔多抗作为捕获抗体、HRP-JEns1C1鼠单抗作为检测抗体和鼠单抗JEns1C1作为捕获抗体、酶标兔多抗作为检测抗体，通过方阵滴定法确定最佳抗原包被浓度和检测抗体浓度，建立抗原定量ELISA检测方法。确定该方法的线性范围及灵敏度，并对其专属性、准确度、精密度和耐用性进行验证。结果 制备了特异性好、效价高的抗JEV-NS1兔多抗和鼠单抗，以兔多抗作为捕获抗体、HRP-JEns1C1鼠单抗作为检测抗体建立了抗原定量ELISA检测方法。该方法在检测范围为250.0～4 000.0 ng/mL时，R~2不低于0.99；高（2 000.0 ng/mL）、中（1 000.0 ng/mL）、低（500.0 ng/mL）3个浓度样品准确度验证回收率为83.7%～103.4%；重复性验证变异系数（CV）分别为5.8%、3.8%、2.9%，中间精密度验证CV分别为5.7%、5.8%、5.3%；耐用性验证CV分别为3.7%、5.7%、5.3%；专属性验证结果显示，该方法只识别JEV-NS1抗原，与其他病毒无交叉反应。各项验证结果均符合乙型脑炎疫苗的质控要求。结论 建立的JEV-NS1抗原定量双抗体夹心ELISA检测方法专属性、准确度、精密度、线性、耐用性均较好，可用于纯化过程样品的抗原检测，为乙型脑炎疫苗研制过程中抗原含量测定提供了质控方法。
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