牛抵抗素基因的克隆及原核表达

来源 :黑龙江畜牧兽医 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wang525659571
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从健康新生牛大网膜脂肪组织中提取总RNA,根据已发表的牛ResistinmRNA序列设计、合成引物,通过RT—PCR进行cDNA扩增,获得了343bp的片段。将该片段克隆于pMD18-T载体后进行序列分析,确认PCR产物为牛ResistincDNA。从阳性克隆中提取质粒,经BamHⅠ和XhoⅠ双酶切,回收343bp的目的片段,定向克隆到pGEX-6P-1表达载体中,提取质粒并再次转化到BL21(DE3)中,成功地筛选出阳性克隆。经IPTG诱导阳性菌,通过SDS—PAGE检测出牛的Resistin基因的表达
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