【摘 要】
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采用引物二聚体配对搭桥法成功扩增了人过敏毒素C5a全长的反义cNDA,将扩增的反义cNDA克隆到原核表达载体pPROEXTM HTc上,与6×His头形成融合基因,转化E.coli DH5α,30℃
【机 构】
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第三军医大学野战外科研究所第一研究室
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采用引物二聚体配对搭桥法成功扩增了人过敏毒素C5a全长的反义cNDA,将扩增的反义cNDA克隆到原核表达载体pPROEXTM HTc上,与6×His头形成融合基因,转化E.coli DH5α,30℃下经IPTG诱导,该融合蛋白在大肠杆菌中以可溶性形式表达,表达量达10%;利用金属螯合亲和层析一步法纯化,得到纯度80%的融合蛋白;烟草蚀刻病毒蛋白酶酶切超滤浓缩后,得到高浓度高纯度人过敏毒素C5a反义肽,经N端蛋白测序鉴定,其氨基酸序列正确.髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)为单
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