【摘 要】
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目的探讨骨桥蛋白(osteopontin,OPN)对人膝骨关节炎软骨细胞基质金属蛋白酶13(matrix metall oproteinase 13,MMP-13)表达的影响,并确定OPN干预的最佳时间和浓度。方法采用原
【机 构】
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深圳市人民医院骨关节科; 暨南大学附属第二临床医学院; 中南大学湘雅医院骨科;
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目(30300396);湖南省博士科研创新项目(CX2011B062)~~
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目的探讨骨桥蛋白(osteopontin,OPN)对人膝骨关节炎软骨细胞基质金属蛋白酶13(matrix metall oproteinase 13,MMP-13)表达的影响,并确定OPN干预的最佳时间和浓度。方法采用原发膝骨关节炎患者自愿捐赠的膝关节软骨,Ⅱ型胶原酶一步消化法分离培养软骨细胞,并行Ⅱ型胶原免疫组织化学染色鉴定。取第1代软骨细胞,分别以1μg/mL浓度的OPN干预培养0、24、48、72 h,以及0、0.5、1、2、4μg/mL浓度的OPN干预培养48 h;实时荧光定量PCR和Western blot检测MMP-13 mRNA和蛋白表达水平。结果免疫组织化学染色鉴定示Ⅱ型胶原染色呈阳性。经1μg/mL OPN干预培养后,软骨细胞MMP-13 mRNA及蛋白表达水平均呈升高趋势,48 h时达峰值,各时间点间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。不同浓度OPN干预培养48 h后,1μg/mL组MMP-13 mRNA表达水平较其余组显著上升(P<0.05),蛋白表达水平亦显著升高,但仅与0μg/mL比较差异有统计学意义(P<0.05);0.5、2、4μg/mL组仅MMP-13蛋白较0μg/mL组显著上升,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 OPN可明显上调人膝骨关节炎软骨细胞MMP-13表达,且具备时间和浓度依赖性,干预最佳时间及浓度分别为48 h及1μg/mL。
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