外周血Sox10基因甲基化水平在肠神经元发育不良诊断中的应用

• 作 者: 程兰杰 张树成
• 机 构: 中国医科大学附属盛京医院小儿外科，沈阳 110004,中国医科大学附属盛京医院小儿外科，沈阳 110004,
• 出 处: 国际儿科学杂志
• 发表日期: 2019年46期
• 关键词: 肠神经元发育不良 外周血 Sox10 甲基化 基因诊断

目的

探讨应用外周血Sox10基因启动子区甲基化水平诊断肠神经元发育不良(intestinal neuronal dysplasia，IND)的可行性，寻求基于外周血诊断IND的无创性基因诊断方法。

方法

收集中国医科大学盛京医院和首都儿研所儿外科2017年至2018年术中确诊病例为研究对象，先天性巨结肠(Hirschsprung disease，HD)组15例及IND组9例。对照组为15例结肠外伤儿童。应用亚硫酸氢盐测序(bisulfite sequencing PCR，BSP)技术分别对三组病例的外周血和结肠组织的Sox10基因启动子区进行甲基化测序；同时应用免疫组织化学染色、qRT-PCR和western blot技术对结肠组织Sox10蛋白的表达进行分析，并与外周血和结肠组织中的Sox10基因甲基化水平进行相关分析。采用受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic，ROC)对外周血Sox10甲基化水平进行诊断效能评价。

结果

对照组外周血中Sox10基因启动子区第32号位点甲基化水平为100%(90%～100%；95%CI：91%～98%)，HD组甲基化水平降为80%(70%～90%；95%CI：65%～90%)，而IND组甲基化水平为60%(50%～80%；95%CI：52%～82%)。免疫组织化学Sox10染色显示，对照组、HD痉挛段、IND中胶质细胞数分别为(2.52±0.98，5.27±1.26，10.54±2.41)。QRT-PCR显示Sox10在对照组、HD痉挛段及IND组结肠中的表达分别为(1.00±0.04，2.75±0.16，3.99±0.10)。Western blot技术显示Sox10蛋白在对照组、HD痉挛段及IND组结肠中的表达呈递增趋势，差异均具有统计学意义(P<0.05)。对照组、HD组和IND组外周血Sox10第32号位点甲基化水平与Sox10基因的表达量呈负相关(r＝－0.88)。ROC曲线显示在HD诊断中Sox10甲基化水平的曲线下面积(area under curve，AUC)为0.818，截断值为85%，诊断灵敏度低；在IND中Sox10甲基化水平的AUC为0.907，截断值为85%，诊断灵敏度为88.9%，特异度为93.3%。

结论

外周血Sox10基因启动子区甲基化水平可作为IND无创诊断的分子标记，为IND的临床诊断提供新的参考指标。