【摘 要】
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目的建立高效快速提取生鲜牛乳中总微生物基因组DNA的方法。方法以生鲜牛乳为原料,采用SDS-蛋白酶K法裂解细胞,酚氯仿有机抽提去除蛋白和醋酸钾溶液沉淀蛋白,制备样品中总微
【机 构】
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山西大学生物技术研究所; 山西出入境检验检疫局; 中国合格评定国家认可中心;
【基金项目】
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国家质检总局科技计划项目(2011IK228)
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目的建立高效快速提取生鲜牛乳中总微生物基因组DNA的方法。方法以生鲜牛乳为原料,采用SDS-蛋白酶K法裂解细胞,酚氯仿有机抽提去除蛋白和醋酸钾溶液沉淀蛋白,制备样品中总微生物基因组DNA。结果以NET(Tris HCl,EDTA,NaCl)作为裂解缓冲液,蛋白酶K消化得到的基因组DNA纯度和产量较高,耗时较短;缓冲液选择NCT(NaCl,CaCl2,Tris HCl)时,PCR产物特异性低于前者且产量较低。RNA酶消化对产品纯度影响不大且会降低产量。用醋酸钾(KAc)沉淀去除蛋白,操作快速简单,耗时最短,但DNA产量最低。结论 SDS-蛋白酶K法提取的生鲜乳微生物总DNA可以作为牛乳样品进一步检测的分子基础。
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