【摘 要】
：
目的:有效构建针对人MGMT(hMGMT)基因的short hairpin RNA(shRNA)质粒表达载体,转染肝癌SMMC-7721细胞,验证shRNA对肝癌SMMC-7721细胞MGMT基因的干扰效果,进一步研究hMGMT的
【机 构】
：
苏州大学附属第一医院肿瘤科,江苏苏州,215000
论文部分内容阅读
目的:有效构建针对人MGMT(hMGMT)基因的short hairpin RNA(shRNA)质粒表达载体,转染肝癌SMMC-7721细胞,验证shRNA对肝癌SMMC-7721细胞MGMT基因的干扰效果,进一步研究hMGMT的功能及临床意义.方法:设计针对hMGMT mRNA靶序列的shRNA,PCR扩增获得目的产物,通过TA克隆目的产物与酶切后的载体片段进行连接,连接后的重组载体转化到大肠杆菌,提取质粒后送测序鉴定.脂质体包裹鉴定后的重组载体,转染肝癌SMMC-7721细胞,利用Real-Time PCR及Western Blot检测RNA干扰效果.结果:重组克隆经菌落PCR及测序证实插入的序列正确,RNA干扰载体转染肝癌SMMC-7721细胞后细胞内MGMT的mRNA及蛋白水平均显著降低.结论:所制备的hMGMT-shRNA在肝癌SMMC-7721细胞中可获得高效转染,并能产生特异性的基因沉默效应,针对hMGMT为靶标的shRNA载体能够有效下调肝癌细胞中MGMT基因的表达,为研究MGMT蛋白的功能以及临床肿瘤合理用药提供思路.
其他文献
该文从挂篮荷载计算、施工流程、支座及临时固结施工、挂篮安装及试验、合拢段施工、模板制作安装、钢筋安装、混凝土的浇筑及养生、测量监控等方面人手,介绍了S226海滨大桥
6月3日,为期四天的第四届中外货代物流企业洽谈会在广州拉开帷幕.洽谈会经商务部批准,由中国国际货运代理协会(CIFA)和世界货运联盟(WCAF)主办.
5月下旬，记者从上海市税务部门了解到，上海市从2005年1月1日起，已率先停征自行车以及各种人力车、拖车、助动车、电动自行车等非营业用非机动车车船使用税（车船使用牌照税）。 新增成本不会用票价消化 按规定，省级人民政府可根据当地实际，决定是否对城乡公共交通车船给予减免税照顾。沪上营业的省际长途客运车有8000多辆，如果长途客运车不在给予照顾之列，长途客运票价会否上涨？ 上海强生旅游公
郑州客运管理处负责人表示，出租车实行个体经营，不利于统一管理和监督。然而，据了解，2003年，郑州大众出租车公司300多名的哥“单飞”成功。目前，他们拥有自己的经营权，直接挂靠客运管理处，只缴纳100元的管理费，比其他的哥少缴纳70元。 河南省郑州市新婚的哥宋利民向出租车公司讨要押金时，在出租车公司内被殴打致死，出租车公司与的哥的种种矛盾就此激化。郑州银河出租车公司（简称“银河公司”）的10
根据新出台的《大连市出租汽车营运号牌管理规定》，大连市出租车营运号牌将无偿使用。大连出租汽车管理处办公室刘主任向记者表示，出租车营运号牌无偿使用，并不代表出租车行业的“门槛”降低了，对出租车经营者的考核、管理会更加规范、严格。据称，大连将在全国率先实行优胜劣汰的管理机制，对不合格的经营者，违章情节严重的，收回其营运号牌，优秀的经营者会优先获得。 大连是全国较早实行出租车营运号牌拍卖的城市之一，一
该文从挂篮荷载计算、施工流程、支座及临时固结施工、挂篮安装及试验、合拢段施工、模板制作安装、钢筋安装、混凝土的浇筑及养生、测量监控等方面人手,介绍了S226海滨大桥
目前，河南省正在对现有的旅游客运企业及车辆进行逐步清理和规范，对符合《河南省道路旅游客运及旅游客运站管理暂行规定》资质和条件的旅游客运企业及旅游客运车辆，根据经营区域不同由相应的运管机构换发经营许可证和办理车辆营运证以及发放旅游客运标志牌。截至目前，全省办理省际、市际旅游客运车辆500余辆。 运力总量控制在20％ 河南省旅游客运市场目前还处在初期发展阶段，存在一些亟待解决的问题：一
中国开征燃油税的动议由来已久，燃油税开征会使道路运输业经营成本发生变化，这种变化对道路运输业来讲到底是利是弊？作为政府部门、运输企业又将如何应对？燃油税开征是否众望所归？带着这些问题，记者走访了几家运输企业。 班线客运：让消费者买单？ A公司是一家拥有多条跨地以上班线的国有运输企业，企业老总刘先生谈到燃油税开征对企业班线经营的影响时回答，“燃油税开征以后，班线车辆将拉升企业的经营成本。
腰椎间盘突出的患者绝大多数经手术治疗可获得满意疗效,但少数病例手术失败需二次手术.我院自1996年～2002年共收治腰椎间盘手术病人428例,12例手术失败,均做二次手术,占2.8%.
建设是基础,运输是目的,发展道路运输是贯彻落实“三个服务”的重要体现。近年来,在湖北省委、省政府的高度重视下,在湖北省交通厅的直接领导下,以贯彻实施《中华人民共和国