制备叶酸靶向共载组织因子途径抑制物2(TFPI－2)及顺铂磁性纳米复合物，探讨其对鼻咽癌HNE－1细胞的靶向性和体外抑制效应。
方法通过酰胺化反应合成叶酸靶向高聚物叶酸－聚乙二醇－聚乙烯亚胺(FA－PEG－PEI)，采用静电吸附技术，将其与本课题组前期制备的载顺铂磁纳米粒(MNP－CDDP)及TFPI－2质粒混合，得到终产物FA－PEG－PEI/MNP－CDDP/TFPI－2。核磁氢谱验证高分子聚合物的合成。动态光散射(DLS)及透射电镜(TEM)观测其粒径、电荷及形态。邻二氮菲法及邻苯二胺法测定纳米复合物中铁及顺铂(CDDP)的含量。琼脂糖凝胶电泳分析载体FA－PEG－PEI/MNP－CDDP与TFPI－2质粒的结合情况。普鲁士蓝铁染色法及荧光显微镜观察磁性纳米复合物对鼻咽癌(NPC)细胞的分子靶向性。Western印迹检测磁性纳米复合物转染HNE－1细胞后TFPI－2蛋白的表达情况。Cell Counting Kit－8(CCK－8)细胞计数试剂盒、流式细胞技术检测复合物对HNE－1细胞增殖、凋亡的影响。
结果核磁氢谱在FA、PEG和PEI相应的频率上可见特征吸收峰。DLS测得产物FA－PEG－PEI/MNP－CDDP/TFPI－2复合物平均粒径为141.1 nm，平均电荷为21.5 mV。透射电镜下可见纳米微粒有良好的分散性，但粒径大小不太均匀。铁含量与顺铂载药量分别为116.2 μg/ml及92.88 μg/ml。琼脂糖凝胶电泳显示，当载体FA－PEG－PEI/MNP－CDDP与TFPI－2质粒质量比≥1时，载体能完全吸附质粒，并且有效保护质粒免受DNA酶的消化作用。铁染色和荧光显微镜观测可见叶酸受体(FR)阳性HNE－1细胞内蓝染磁颗粒及绿色荧光点比FR阴性CNE－2细胞显著增多(P<0.05)。HNE－1细胞被载TFPI－2质粒的复合物转染后，TFPI－2蛋白的表达量比空白载体组及单纯质粒组明显增高(P<0.05)。复合物对HNE－1细胞有明显的体外抑制效应，抑制率及凋亡率分别为64.00%及49.61%，明显高于载体组(8.19%，9.26%)、单载质粒组(40.35%，19.85%)、单载顺铂组(56.15%，36.46%)，均P<0.05。
结论采用酰胺化反应和静电吸附技术成功合成了FA－PEG－PEI/MNP－CDDP/TFPI－2磁性纳米复合物，该复合物对鼻咽癌HNE－1细胞具有良好的靶向性及体外抑制效应。