GST-His-Heparinase I双标签融合蛋白的原核表达与纯化

• 作 者: 刘卫超 程咏梅 邓超 丁建文 宋志新 陈敬华
• 机 构: 江南大学药学院,江南大学无锡医学院,常山生化药业（江苏）有限公司
• 出 处: 工业微生物
• 发表日期: 2014年5期
• 关键词: 肝素酶I GST.His双标签 原核表达 纯化 heparinase I GST and His tags prokaryotie expression pu
• 基金项目: 教育部新世纪优秀人才支持计划（No.NCET-10-0435）,教育部博士点基金（No.20110093110008）资助.

以pETl5b-Hep I为模板，通过PCR技术扩增出上游合有6×His标签的HepI基因序列，克隆至表达载体pGEX-4T-1。测序鉴定后，将重组表达质粒pGEX．His．HepI转入E．coliBL21（DE3）感受态细菌，经IPTG诱导表达。表达产物可溶部分用GSTrapFF和HisTrapHP柱两步亲和纯化，所得产物经SDS—PAGE检测，在66kDa和43kDa处显示特异条带，分别与GST．His．HepI和His-HepI融合蛋白预期分子量相符；最终His—HepI融合蛋白的比酶活为