【摘 要】
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现有的ATPase活性测定方法是利用分光光度法,偶联丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶的反应,测定NADH在340nm处光密度的减少,求出ATP的水解量,以及利用~(32)γ-ATP同位素测定或用比色法
【机 构】
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南开大学分子生物学研究所,南开大学分子生物学研究所 天津,天津 河北大学85届生化专业毕业生
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现有的ATPase活性测定方法是利用分光光度法,偶联丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶的反应,测定NADH在340nm处光密度的减少,求出ATP的水解量,以及利用~(32)γ-ATP同位素测定或用比色法测定ATP水解的Pi等,后一方法因实验条件简单,仍是最常用的分析方法。Fiske建立的钼蓝比色法虽经改进,灵敏度仍较低。Itaya发现磷钼酸与孔雀石绿生成的复合物,有很高的克分子消光系数,可用于灵敏测定Pi。但用于ATPase分析时,酸性钼酸催化的底物ATP非酶促水解,将严重干扰对酶活性的测定。Lanzetta利用柠檬酸淬灭新生Pi(如
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