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【摘 要】目的：分析美国Bio-Rad D10糖化血红蛋白测定仪（HPLC）与英国DREW DS5糖化血红蛋白仪在社区医院的不同应用优势，将美国Bio-Rad D10 HbA1c检测试剂盒（HPLC法）和英国DREW DS5 HbA1c检测试剂盒（阳离子交换层析柱法）检测同一样本，比较HbA1c的检测结果，考查两种方法的精密度。 方法：取未定值的HbA1c中、高两水平质控，用两台糖化血红蛋白测定仪各进行20批次检测，分析两种仪器的批内精密度、批间精密度。临床确诊的糖尿病患者和非糖尿病患者各50例作为病例组和对照组，其中共有高胆红素患者4例，高甘油三酯患者24例。分别进行伯乐公司D10与英国DREW DS5的HbA1c双份检测，通过回归方程分析两台糖化血红蛋白测定仪结果的均一性。结果：1）D-10糖化血红蛋白分析仪的低值和高值质控品的批内和日间精密度分别为1.53%、1.87%、0.74%、0.74%，均符合CV小于2%的临床要求。 D-10糖化血红蛋白分析仪的批内精密度和日间精密度均明显优于DS5糖化血红蛋白分析仪。 2）T检验分析发现， D10糖化血红蛋白分析仪的检测值显著高于DS5，P<0.05。3）病例组的糖化比对在Bio-Rad D10和DREW DS5糖化血红蛋白分析系统间的相关系数R?为0.95，糖化结果基本一致。而对照组的病例组的糖化比对在Bio-Rad D10和DREW DS5糖化血红蛋白分析系统间的相关系数R?为0.3845，小于0.95，糖化结果不一致。 4）第三方的评定结果显示D-10与国际认可的第三方参考实验室之间的结果偏差更小。结论：Bio-Rad D10糖化血红蛋白测定仪的各项性能均优于DREW DS5糖化血红蛋白测定仪，更适合在社区医院中推广使用。
【关键词】HPLC；阳离子交换层析柱；精密度
【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484（2013）06-0086-01
近年來，世界各国糖尿病的患病率有急剧增加的趋势，发展中国家和部分发达国家尤其明显，世界卫生组织已将糖尿病列为影响全球公众健康的重要疾病[1]。近20年来，我国开展了5次大规模人群的成年人糖尿病流行病学调查，其中糖尿病患病率1980年为1%，1989年为2.02%，1994年为2.51%，1996年为3.2%[2]，2008年上升至9.7%，糖尿病防治已成为我国医务工作人员刻不容缓的严峻任务[1]。目前糖尿病已纳入社区慢性病管理之一，血糖监测是糖尿病管理中的重要组成部分，其结果有助于评估糖尿病患者糖代谢紊乱的程度，制定合理的降糖方案，同时反映降糖治疗的效果并指导治疗方案的调整，其中患者进行自我血糖监测（SMBG）是血糖监测的基本形式，HbA1c是反映长期血糖控制水平的金标准[3]，与糖尿病并发症的风险密切相关。
枫林街道现有常住人口11.2万，其中经临床诊断的糖尿病患者并纳入社区慢性病管理的有2091人。糖化血红蛋白测定仪是测定HbA1c最能反应血红蛋白与葡萄糖结合的程度的仪器，糖化血红蛋白是糖尿病患者疾病控制程度一项良好的指标，可反映阶段性血糖水平。糖化血红蛋白HbA1c作为糖尿病筛选、诊断、血糖控制、疗效考核的有效检测指标。为了给社区医生提供准确，快速的HbA1c监测结果，本研究对Bio-Rad D10和DREW DS5两款糖化血红蛋白测定仪进行了检测结果的数据分析对比，和方法、原理、操作等各方面的对比，探寻适合在社区医院中推广使用机型。
1 材料和方法
1.1 标本
以门诊和住院病人中临床确诊的糖尿病患者50例作为病例组，其中含有高胆红素样本1例，高甘油三酯样本9例。以门诊和住院病人中临床确诊非糖尿病患者53例作为对照组，其中含有高胆红素样本3例，高甘油三酯样本15例。以标本采集按照标准实验室操作程序收集血液样本，全血样本用含EDTA的真空采血管采集。
1.2 仪器和试剂
检测系统（X）：Bio-Rad D10糖化血红蛋白测定仪，利用离子交换高压液相色谱（HPLC）原理测定HbA1c 试剂采用Bio-Rad D10原装HbA1c检测试剂盒。试剂批号：洗液/稀释液（AA10227） ，1号缓冲液（AA10102），2号缓冲液（AA10389），校准品（S10100） 检测系统（Y）：DREW DS5糖化血红蛋白测定仪，采用阳离子交换低压液相色谱原理测定HbA1c。
试剂采用DREW DS5 HbA1c检测试剂盒。试剂批号：溶血素（72349），缓冲液A（72315），缓冲液B（72352），层析柱（M-0188876-1）.
1.3 方法
1.3.1 精密度试验：（1）批内精密度：取非定值MAS的低、高两个浓度HbA1c的质控品，低值批号（DBCL 12091）， 高值批号（DBCL 12092），同时在两台糖化血红蛋白测定仪进行连续重复检测20次。（2）日间精密度：取非定值MAS的中、高两个浓度HbA1c的质控品，低值批号（DBCL 12091）， 高值批号（DBCL 12092），同时在两台糖化血红蛋白测定仪检测，连续20天。
1.3.2 比对实验：
在Bio-Rad D10用校准品定标校准及DREW DS5按说明书设定校准参数，进行检测，各方法原理见说明书，以操作规程为标准。校准仪器，测定质控，质控结果输入临检中心室内质控系统中，在控后按常规操作。用同步盲测法，将样本与两个浓度质控随机搁置，统一编盲，同步接受检测两次，记录结果。
1.3.3 数据处理：（1）精密度评价：分别计算两台糖化血红蛋白测定仪的低值和高值的平均值和标准差，然后计算其变异系数（coefficient of variance，CV）。两台糖化血红蛋白分析系统的精密度评价标准：批内精密度（CV）和日间精密度（CV）都小于厂商声明和本实验室规定的精密度要求。（2）T检验：分析两台糖化血红蛋白测定仪分析值之间是否有差异。（3）通过计算线性回归方程来分析两台糖化血红蛋白测定仪是否一致。[4] 2 结果
2.1 不同检测系统的精密度评价
由表1可知，通过对质控品的分析，D-10和DS5糖化血红蛋白分析仪的批内精密度分别小于1.53%和1.98%，日间精密度分别小于1.87%和2.52%，均符合临床要求。D-10糖化血红蛋白分析仪的批内精密度和日间精密度均明显优于DS5糖化血红蛋白分析仪。
2.4 第三方的评定结果
2011年开始我科室参加了中山医院发起的糖化血红蛋白一致性计划[5]， 2011年3月-6月份共四次35份样品，用DREW DS5糖化血红蛋白测定仪检测HbA1c样本，由反馈得知DS5与参考实验室定值的偏差在 -6.8%—7.7%之间，其中80%在定值以下，而在2011年7月，共2次20份样品，用Bio-Rad D10糖化血红蛋白测定仪检测HbA1c样本，与质控高低值同时检测两次，每次检测值经校准后发布，由反馈得知与参考实验室定值的偏差在 -4.1%—4.8%之间，其中55%在定值以下。说明虽然D-10的检测结果高于DS5，但与参考实验室的偏差更小。
3 讨论
Bio-Rad D10糖化血红蛋白测定仪利用高压液体层析（HPLC）原理分离正常和异常血红蛋白并确定它们的相对百分含量，此法为临床测定的标准方法，此测定仪可从全血试管中自动吸取样本，随后进行稀释和分析，一次检测10个样本，每个样本在3分钟内即可完成检测。DREW DS5糖化血紅蛋白测定仪采用阳离子交换层析柱，分布洗出分离血红蛋白中异常血红蛋白，所分离的血红蛋白成分以415nm波长检测其吸光度并计算出各种成分百分比。DREW DS5糖化血红蛋白测定仪需对每个样本进行手动稀释，一次检测15个样本，每个样本需5分钟完成检测。
本研究在对两种仪器进行了比对实验后发现，Bio-Rad D10糖化血红蛋白测定仪的批内和天间精密度均小于2%，优于DREW DS5的精密度。
对于两种方法间的比较发现，D-10糖化血红蛋白测定仪不论对照组还是病例组样品的测定值均显著高于DS5的测定值（绝对差值分别为0.6%和0.8%，P<0.05）。经线性回归分析， D-10和DS5在病例组样本的比较时， 相关系数R?为0.95，糖化结果基本一致，而对于对照组样本比较时，相关系数R?为0.3845，小于0.95，糖化结果不一致。
同时我科室参加了中山医院发起的糖化血红蛋白一致性计划[5]，该计划为参与实验室结果与具有国际认可的参考实验室之间进行结果比对。参照上海糖化血红蛋白一致性计划作业指导书，参加实验室精密度比对实验标准化操作规程，判定标准为检测值与参考实验室定值偏差 <8%。2011年3月-6月份共四次35份样品，用DREW DS5糖化血红蛋白测定仪检测HbA1c样本，与质控高低值同时检测两次，每次检测值经校准后发布，由反馈得知与参考实验室定值的偏差在 -6.8%—7.7%之间，其中80%在定值以下，2011年7月，共2次20份样品，用Bio-Rad D10糖化血红蛋白测定仪检测HbA1c样本，与质控高低值同时检测两次，每次检测值经校准后发布，由反馈得知与参考实验室定值的偏差在 -4.1%—4.8%之间，其中55%在定值以下。虽然Bio-Rad D10糖化血红蛋白测定仪的结果比DS5高，但第三方评定结果与本实验室的检测结论一致，而且D10与参考实验室的结果相比较偏差更小，说明D10的结果的准确性优于DS5。
相比之下Bio-Rad D10具有快速、简便、精巧、准确等特点，更适合在社区医院中推广使用。
参考文献：
[1] 卞华 潘柏申. 糖尿病. 中华医学检验杂志，2011，8，34（8）：764-768
[2] Yang W，Lu J，et al. Prevalence of diabetes among men and women in China. N Engl J Med，2010，362：1090-1101
[3] 中华医学会糖尿病学分会. 中国血糖监测临床应用指南（2011版）. 中华医学杂志，2011.91：656-664
[4] 吕慧，赖战峰，李海炜等.血尿素氮、肌酐及尿酸在两种生化分析系统的比对和偏倚评估.中华检验医学杂志，2012，35：550-553
[5] 吴炯，邵文琦，周琰等.上海地区糖化血红蛋白一致性计划建立和结果初步评价. 中华检验医学杂志，2012，35：370-372
【关键词】HPLC；阳离子交换层析柱；精密度
【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484（2013）06-0086-01
近年來，世界各国糖尿病的患病率有急剧增加的趋势，发展中国家和部分发达国家尤其明显，世界卫生组织已将糖尿病列为影响全球公众健康的重要疾病[1]。近20年来，我国开展了5次大规模人群的成年人糖尿病流行病学调查，其中糖尿病患病率1980年为1%，1989年为2.02%，1994年为2.51%，1996年为3.2%[2]，2008年上升至9.7%，糖尿病防治已成为我国医务工作人员刻不容缓的严峻任务[1]。目前糖尿病已纳入社区慢性病管理之一，血糖监测是糖尿病管理中的重要组成部分，其结果有助于评估糖尿病患者糖代谢紊乱的程度，制定合理的降糖方案，同时反映降糖治疗的效果并指导治疗方案的调整，其中患者进行自我血糖监测（SMBG）是血糖监测的基本形式，HbA1c是反映长期血糖控制水平的金标准[3]，与糖尿病并发症的风险密切相关。
枫林街道现有常住人口11.2万，其中经临床诊断的糖尿病患者并纳入社区慢性病管理的有2091人。糖化血红蛋白测定仪是测定HbA1c最能反应血红蛋白与葡萄糖结合的程度的仪器，糖化血红蛋白是糖尿病患者疾病控制程度一项良好的指标，可反映阶段性血糖水平。糖化血红蛋白HbA1c作为糖尿病筛选、诊断、血糖控制、疗效考核的有效检测指标。为了给社区医生提供准确，快速的HbA1c监测结果，本研究对Bio-Rad D10和DREW DS5两款糖化血红蛋白测定仪进行了检测结果的数据分析对比，和方法、原理、操作等各方面的对比，探寻适合在社区医院中推广使用机型。
1 材料和方法
1.1 标本
以门诊和住院病人中临床确诊的糖尿病患者50例作为病例组，其中含有高胆红素样本1例，高甘油三酯样本9例。以门诊和住院病人中临床确诊非糖尿病患者53例作为对照组，其中含有高胆红素样本3例，高甘油三酯样本15例。以标本采集按照标准实验室操作程序收集血液样本，全血样本用含EDTA的真空采血管采集。
1.2 仪器和试剂
检测系统（X）：Bio-Rad D10糖化血红蛋白测定仪，利用离子交换高压液相色谱（HPLC）原理测定HbA1c 试剂采用Bio-Rad D10原装HbA1c检测试剂盒。试剂批号：洗液/稀释液（AA10227） ，1号缓冲液（AA10102），2号缓冲液（AA10389），校准品（S10100） 检测系统（Y）：DREW DS5糖化血红蛋白测定仪，采用阳离子交换低压液相色谱原理测定HbA1c。
试剂采用DREW DS5 HbA1c检测试剂盒。试剂批号：溶血素（72349），缓冲液A（72315），缓冲液B（72352），层析柱（M-0188876-1）.
1.3 方法
1.3.1 精密度试验：（1）批内精密度：取非定值MAS的低、高两个浓度HbA1c的质控品，低值批号（DBCL 12091）， 高值批号（DBCL 12092），同时在两台糖化血红蛋白测定仪进行连续重复检测20次。（2）日间精密度：取非定值MAS的中、高两个浓度HbA1c的质控品，低值批号（DBCL 12091）， 高值批号（DBCL 12092），同时在两台糖化血红蛋白测定仪检测，连续20天。
1.3.2 比对实验：
在Bio-Rad D10用校准品定标校准及DREW DS5按说明书设定校准参数，进行检测，各方法原理见说明书，以操作规程为标准。校准仪器，测定质控，质控结果输入临检中心室内质控系统中，在控后按常规操作。用同步盲测法，将样本与两个浓度质控随机搁置，统一编盲，同步接受检测两次，记录结果。
1.3.3 数据处理：（1）精密度评价：分别计算两台糖化血红蛋白测定仪的低值和高值的平均值和标准差，然后计算其变异系数（coefficient of variance，CV）。两台糖化血红蛋白分析系统的精密度评价标准：批内精密度（CV）和日间精密度（CV）都小于厂商声明和本实验室规定的精密度要求。（2）T检验：分析两台糖化血红蛋白测定仪分析值之间是否有差异。（3）通过计算线性回归方程来分析两台糖化血红蛋白测定仪是否一致。[4] 2 结果
2.1 不同检测系统的精密度评价
由表1可知，通过对质控品的分析，D-10和DS5糖化血红蛋白分析仪的批内精密度分别小于1.53%和1.98%，日间精密度分别小于1.87%和2.52%，均符合临床要求。D-10糖化血红蛋白分析仪的批内精密度和日间精密度均明显优于DS5糖化血红蛋白分析仪。
2.4 第三方的评定结果
2011年开始我科室参加了中山医院发起的糖化血红蛋白一致性计划[5]， 2011年3月-6月份共四次35份样品，用DREW DS5糖化血红蛋白测定仪检测HbA1c样本，由反馈得知DS5与参考实验室定值的偏差在 -6.8%—7.7%之间，其中80%在定值以下，而在2011年7月，共2次20份样品，用Bio-Rad D10糖化血红蛋白测定仪检测HbA1c样本，与质控高低值同时检测两次，每次检测值经校准后发布，由反馈得知与参考实验室定值的偏差在 -4.1%—4.8%之间，其中55%在定值以下。说明虽然D-10的检测结果高于DS5，但与参考实验室的偏差更小。
3 讨论
Bio-Rad D10糖化血红蛋白测定仪利用高压液体层析（HPLC）原理分离正常和异常血红蛋白并确定它们的相对百分含量，此法为临床测定的标准方法，此测定仪可从全血试管中自动吸取样本，随后进行稀释和分析，一次检测10个样本，每个样本在3分钟内即可完成检测。DREW DS5糖化血紅蛋白测定仪采用阳离子交换层析柱，分布洗出分离血红蛋白中异常血红蛋白，所分离的血红蛋白成分以415nm波长检测其吸光度并计算出各种成分百分比。DREW DS5糖化血红蛋白测定仪需对每个样本进行手动稀释，一次检测15个样本，每个样本需5分钟完成检测。
本研究在对两种仪器进行了比对实验后发现，Bio-Rad D10糖化血红蛋白测定仪的批内和天间精密度均小于2%，优于DREW DS5的精密度。
对于两种方法间的比较发现，D-10糖化血红蛋白测定仪不论对照组还是病例组样品的测定值均显著高于DS5的测定值（绝对差值分别为0.6%和0.8%，P<0.05）。经线性回归分析， D-10和DS5在病例组样本的比较时， 相关系数R?为0.95，糖化结果基本一致，而对于对照组样本比较时，相关系数R?为0.3845，小于0.95，糖化结果不一致。
同时我科室参加了中山医院发起的糖化血红蛋白一致性计划[5]，该计划为参与实验室结果与具有国际认可的参考实验室之间进行结果比对。参照上海糖化血红蛋白一致性计划作业指导书，参加实验室精密度比对实验标准化操作规程，判定标准为检测值与参考实验室定值偏差 <8%。2011年3月-6月份共四次35份样品，用DREW DS5糖化血红蛋白测定仪检测HbA1c样本，与质控高低值同时检测两次，每次检测值经校准后发布，由反馈得知与参考实验室定值的偏差在 -6.8%—7.7%之间，其中80%在定值以下，2011年7月，共2次20份样品，用Bio-Rad D10糖化血红蛋白测定仪检测HbA1c样本，与质控高低值同时检测两次，每次检测值经校准后发布，由反馈得知与参考实验室定值的偏差在 -4.1%—4.8%之间，其中55%在定值以下。虽然Bio-Rad D10糖化血红蛋白测定仪的结果比DS5高，但第三方评定结果与本实验室的检测结论一致，而且D10与参考实验室的结果相比较偏差更小，说明D10的结果的准确性优于DS5。
相比之下Bio-Rad D10具有快速、简便、精巧、准确等特点，更适合在社区医院中推广使用。
参考文献：
[1] 卞华 潘柏申. 糖尿病. 中华医学检验杂志，2011，8，34（8）：764-768
[2] Yang W，Lu J，et al. Prevalence of diabetes among men and women in China. N Engl J Med，2010，362：1090-1101
[3] 中华医学会糖尿病学分会. 中国血糖监测临床应用指南（2011版）. 中华医学杂志，2011.91：656-664
[4] 吕慧，赖战峰，李海炜等.血尿素氮、肌酐及尿酸在两种生化分析系统的比对和偏倚评估.中华检验医学杂志，2012，35：550-553
[5] 吴炯，邵文琦，周琰等.上海地区糖化血红蛋白一致性计划建立和结果初步评价. 中华检验医学杂志，2012，35：370-372