Sirt1基因shRNA干扰载体构建及其对细胞增殖和凋亡的影响

• 作 者: 杜文婷 任思冲 所起凤 杨鸣鸣 何丹 刘戟
• 机 构: 四川大学华西基础医学与法医学院生物化学与分子生物教研室,四川中医药高等专科学校药学与检验系医学检验教研室
• 出 处: 生物医学工程学杂志
• 发表日期: 2011年5期
• 关键词: Sirt1 shRNA 人类Sirt1 shRNA干扰载体 干扰载体 凋亡 细胞增殖 克隆细胞株 细胞凋亡 载体构建

本实验目的在于构建SirtlshRNA干扰载体，探讨Sirtl对HepG2、A549和293T细胞增殖和凋亡的影响。设计并合成Sirtl的shRNA序列，重组到pGenesil—1．0质粒载体中筛选出pGenesil·1．0-Sirtl阳性克隆并测序。将构建好载体转染HepG2、A549和293T细胞，用RT-PCR、Westernblot检测各细胞中Sirtl表达水平，MTT测细胞增殖活性，加入阿霉素处理三组细胞后，用MTT检测细胞凋亡情况。结果表明成功构建SirtlshRNA干扰载体，各细胞