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【摘要】 目的：通过对南京市2014-2015年新发现艾滋病病毒感染者/艾滋病患者（HIV/AIDS）病例首次外周血T淋巴细胞亚群的检测，了解并估计病例的免疫状况及疾病进展情况。方法：以四色荧光抗体标记610份新发现HIV/AIDS病例的抗凝全血，采用单平台流式细胞仪检测T淋巴细胞各亚群的绝对值，计算CD4+/CD8+T淋巴细胞的比值。所得数据用Excel和SPSS软件进行统计分析。结果：T淋巴细胞亚群检测结果均值：CD3+T为（1731±823）个/μL，CD4+T为（384±231）个/μL，CD8+T为（1268±665）个/μL，CD4+/CD8+为（0.33±0.20）。21.3%病例CD4+T<200个/μL，CD4+/CD8+<1的病例占99.0%。進一步分析发现，不同性别、年龄和传播途径对T淋巴细胞亚群计数均有影响。结论：南京市HIV/AIDS病例首次CD4+T淋巴细胞水平较低，21.3%新发现病例已进入艾滋病期，应进一步加大早发现早治疗的工作力度，保证新发现病例能够及时检测CD4细胞数量，把握最佳治疗时机。
【关键词】 新发现HIV感染者； 艾滋病； CD4+T淋巴细胞； CD8+T淋巴细胞
【Abstract】 Objective：To examine the level of immunity and disease progression through the first detection of T lymphocyte subset count test of newly detected HIV/AIDS cases in Nanjing 2014-2015.Method：A total of 610 whole blood samples collected from HIV/AIDS cases were stained with four color fluorescence monoclonal antibody，and detected the absolute number of T lymphocyte subset by the single platform flow cytometry.The results were statistically analyzed by Excel and SPSS software after counting the ratio of CD4+/CD8+.Result：The mean value of absolute number of CD3+T was （1731±823）/μL，CD4+T was （384±231）/μL，CD8+T was （1268±665）/μL and CD4+/CD8+ was （0.33±0.20）.And the persons less than 200/μL（CD4+ T-LC） and 1 （CD4+/CD8+） account for 21.3% and 99.0% of tested HIV/AIDS cases.Further analysis showed that the different gender，age and transmission had influence on T lymphocyte subsets test result.Conclusion：The level of CD4+T lymphocytes in the first detection among HIV/AIDS patients is low in Nanjing area，21.3% of newly detected HIV/AIDS patients have already been AIDS，early intervention and early treatment should be strengthened to assure the first time of CD4 count test，which is important for prevention and control of AIDS.
【Key words】 Newly detected HIV/AIDS cases； AIDS； CD4+ T lymphocytes； CD8+ T lymphocytes
First-author’s address：Nanjing Municipal Center for Disease Control and Prevention，Nanjing 210003，China
doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2016.32.016
艾滋病（acquired immunodeficiency syndrome，AIDS）是近现代最严重的大流行病之一，近年来报道的AIDS死亡病例中，80%患者未曾接受过抗病毒治疗[1]。艾滋病病毒（human immunodeficiency virus，HIV）攻击人体的免疫系统中的重要细胞CD4+T淋巴细胞（简称CD4细胞），导致其数量减少、功能缺失，进而破坏机体免疫平衡造成免疫功能进行性衰退[2]。因此，对T淋巴细胞亚群检测，尤其是CD4细胞水平的检测是判定HIV感染者病程、评价抗病毒治疗效果的重要指标[3-4]。因此为了解新发现HIV/AIDS病例的免疫状况及疾病进展情况，本文通过对2014-2015年南京市610例新发现的HIV/AIDS病例外周血T淋巴细胞亚群进行检测并分析探讨其相关影响因素，现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料 选择南京市2014-2015年经HIV抗体确证为阳性并随访完成CD4+T淋巴细胞检测的病例共610例。
1.2 主要仪器与试剂 采用BD FACSCalibur流式细胞仪；MultiTEST四色免疫荧光试剂：MultiTEST CD3 FITC/CD8 PE/CD45 PerCP/CD4 APC Reagent；TruCOUNT 绝对计数管：含有已知数量的标准微球；FACS溶血素（10×）：用已过滤的双蒸水稀释至1×；鞘液；FACSCOMP优化条件标准微球：未标记的FITC、PE、PerCP、APC试剂，用于仪器配套质控，以上仪器和试剂均由美国BD公司生产。CD4全血质控品由美国Bectman公司生产。 1.3 方法 参照《全国艾滋病检测技术规范》（2009年版）和（2015年修订版）及《CD4+T淋巴细胞检测及质量保证指南》及仪器的操作规程的要求进行。
1.3.1 样品的采集与制备 用EDTA抗凝管采集外周静脉血5 mL，并于24 h内进行检测，CD4全血质控同标本一同进行操作。分别在TruCOUNT绝对计数管中加入10 μL四色免疫荧光试剂和50 μL颠倒混匀的全血，混匀后室温避光孵育15 min，在每管中加入1×FACS溶血素450 μL，混匀，室温避光孵育15 min，待检。
1.3.2 样品检测 样品上机检测前，需进行仪器质控，要求结果报告为“PASS”，再将制备好的全血样品上机，按照仪器操作规程检测T淋巴细胞亚群数值，并计算CD4+/CD8+T淋巴细胞的比值。每次检测都用全血质控来监测试验的重复性和准确性。
1.4 统计学方法 将样本检测结果录入Excel，使用SPSS 17.0统计软件进行独立样本t检验和方差分析。P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 基本情况 本次新发现HIV/AIDS病例并首次参加T淋巴细胞亚群检测的共610例，其中男563例，占92.3%，女47例，占7.7%；年龄12～91岁，平均（33.4±12.6）岁，中位年龄29岁，<30岁315例，占51.6%，30～59岁275例，占45.1%，≥60岁20例，占3.3%；经同性传播409例，占67.0%，异性传播126例，占20.7%，经注射毒品传播12例，占2.0%，其余不详。
2.2 首次CD4细胞检测结果 610例HIV/AIDS病例首次检测CD4细胞的绝对值范围为2～1897个/μL，平均（384±231）个/μL。其中CD4细胞<200个/μL的130例，占21.3%；200～349个/μL的154例，占25.2%；350～499个/μL的166例，占27.2%；≥500个/μL的160例，占26.2%。所有病例中CD4+/CD8+<1的病例有604例，占99.0%。
2.3 不同性别HIV/AIDS病例T淋巴细胞亚群结果 男性的CD3+T、CD4+T和CD8+T淋巴细胞的绝对计数均高于女性，且差异均有统计学意义（t=6.393、3.461、6.188，P<0.05），但女性CD4+/CD8+T淋巴细胞的比值却略高于男性，差异无统计学意义（t=-1.046，P=0.296>0.05）。见表1。
2.4 不同年龄段HIV/AIDS病例T淋巴细胞亚群结果 610例HIV/AIDS病例分为3个年龄段进行方差分析，CD3+T、CD4+T和CD8+T淋巴细胞的绝对计数比较，差异均有统计学意义（F=19.288、9.092、14.353，P<0.05），进一步进行多样本的两两比较发现年龄<30岁的CD3+T、CD4+T和CD8+T淋巴細胞绝对计数均高于另外两个年龄段，差异均有统计学意义（P<0.05）；而30～59岁的T淋巴细胞各亚群计数均高于≥60岁，差异均无统计学意义（PCD3=0.427，PCD4=0.528，PCD8=0.611）。三个年龄段CD4+/CD8+淋巴细胞的比值随着年龄增长呈递减趋势，但差异无统计学意义（F=0.187，P=0.829）。见表2。
2.5 不同传播途径HIV/AIDS病例T淋巴细胞亚群结果 不同传播途径的HIV/AIDS病例经方差分析，CD3+T、CD4+T和CD8+T淋巴细胞的绝对计数比较，差异均有统计学意义（F=5.869、3.327、4.798，P<0.05），进一步进行多样本的两两比较发现同性传播T淋巴细胞各亚群计数均高于异性传播，且差异均有统计学意义（P<0.05），除此以外不同传播途径的T淋巴细胞各亚群计数两两比较差异均无统计学意义（P>0.05）。且不同传播途径的CD4+/CD8+T淋巴细胞比值比较，差异均无统计学意义（F=0.657，P=0.579>0.05）。
3 讨论
T淋巴细胞亚群的测定是检测机体细胞免疫功能的重要指标，其中的CD4+T淋巴细胞亚群作为HIV病毒的主要靶细胞，已经成为HIV感染者病程、预测临床进展以及评价抗病毒治疗效果的重要指标[5-8]。HIV感染者血液中CD4细胞以每年25～40个/μL的幅度下降，如急转直下至200个/μL，则为疾病恶化先兆[9-10]。研究显示，本市新发现并已检测CD4的HIV/AIDS病例CD4细胞计数的平均值为（384±231）个/μL，这一数值略高于2010年全国新发现的HIV/AIDS病例首次CD4值（334±302）个/μL[11]。本市有21.3%的新发现病例CD4细胞<200个/μL，为长期感染者，极易发生机会性感染，虽然这一比例低于全国的33.1%[11]，但这部分病例发现较晚，一旦病情发生不可逆发展，即使开展抗病毒治疗，也可能对器官造成不可逆的损伤和破坏，降低患者生存质量，死亡率上升[12-13]。因此及时的诊断和CD4细胞水平评估将有效提高HIV感染者的生存质量[14]。
本调查发现男性HIV/AIDS病例T淋巴细胞亚群绝对计数均高于女性，且差异均有统计学意义（P<0.05），而文献[15]报道，在健康成年人群中男性T淋巴细胞亚群绝对计数虽略高于女性，但差异无统计学意义（P>0.05），这与本调查结果尽管并不完全一致，但变化趋势是一样的，因此推断这是生理性差异，目前并无研究表明这种变化趋势与HIV感染有关，而本次调查中CD4+/CD8+T淋巴细胞的比值在不同性别中并无统计学差异，更是证明了上述推断。
本次检测还发现随着年龄增长，T淋巴细胞亚群计数呈下降趋势，尤其是在30岁以下的年龄段，与30岁以上两个年龄段差异均有统计学意义（P<0.05），这与文献[16-17]报道相似。可能是由于随着年龄的增长，或者是感染时限的延长，机体的自身免疫力下降，导致免疫细胞破坏加剧，疾病的进展更快，因此要严密监控高龄组的T淋巴细胞亚群的变化情况[18-20]。 在此前的报道中，尚未发现不同传播途径对T淋巴细胞亚群的影响，而本研究发现同性传播的T淋巴细胞亚群显著性高于异性传播，这与之前报道不符，进一步分析数据发现同性传播病例占67.0%，异性传播只占20.7%，且异性传播中超过27.0%是女性，笔者推测病例分布的不均衡以及性别的因素均影响了结果，在下一次检测中增加并均衡标本兼测量来进一步观察不同传播途径对T淋巴细胞亚群计数的影响。
综上所述，新发现的HIV感染者并不一定是新发感染，今后的工作应加大早发现、早干预、早治疗的工作力度，加强管理，合理分配CD4检测能力，及时了解HIV/AIDS患者的免疫状况，并结合影响T淋巴细胞的因素，有针对性的开展抗病毒治疗，提高生存质量。
参考文献
[1] http：//news.xinhuanet.com/society/2011-05/17/c_121424237.htm [EB/OL].新华网，中国艾滋病死亡数大幅增加居传染病死亡榜首，2011/5/17.
[2] Carré N，Boufassa F，Hubert J B，et al.Predictive value of viral load and other markers for progression to clinical AIDS after CD4+ cell count falls below 200/microL. SEROCO & HEMOCO Study Group[J].Int J Epidemiol，1998，27（5）：897-903.
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（收稿日期：2016-08-01） （本文编辑：程旭然）
【关键词】 新发现HIV感染者； 艾滋病； CD4+T淋巴细胞； CD8+T淋巴细胞
【Abstract】 Objective：To examine the level of immunity and disease progression through the first detection of T lymphocyte subset count test of newly detected HIV/AIDS cases in Nanjing 2014-2015.Method：A total of 610 whole blood samples collected from HIV/AIDS cases were stained with four color fluorescence monoclonal antibody，and detected the absolute number of T lymphocyte subset by the single platform flow cytometry.The results were statistically analyzed by Excel and SPSS software after counting the ratio of CD4+/CD8+.Result：The mean value of absolute number of CD3+T was （1731±823）/μL，CD4+T was （384±231）/μL，CD8+T was （1268±665）/μL and CD4+/CD8+ was （0.33±0.20）.And the persons less than 200/μL（CD4+ T-LC） and 1 （CD4+/CD8+） account for 21.3% and 99.0% of tested HIV/AIDS cases.Further analysis showed that the different gender，age and transmission had influence on T lymphocyte subsets test result.Conclusion：The level of CD4+T lymphocytes in the first detection among HIV/AIDS patients is low in Nanjing area，21.3% of newly detected HIV/AIDS patients have already been AIDS，early intervention and early treatment should be strengthened to assure the first time of CD4 count test，which is important for prevention and control of AIDS.
【Key words】 Newly detected HIV/AIDS cases； AIDS； CD4+ T lymphocytes； CD8+ T lymphocytes
First-author’s address：Nanjing Municipal Center for Disease Control and Prevention，Nanjing 210003，China
doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2016.32.016
艾滋病（acquired immunodeficiency syndrome，AIDS）是近现代最严重的大流行病之一，近年来报道的AIDS死亡病例中，80%患者未曾接受过抗病毒治疗[1]。艾滋病病毒（human immunodeficiency virus，HIV）攻击人体的免疫系统中的重要细胞CD4+T淋巴细胞（简称CD4细胞），导致其数量减少、功能缺失，进而破坏机体免疫平衡造成免疫功能进行性衰退[2]。因此，对T淋巴细胞亚群检测，尤其是CD4细胞水平的检测是判定HIV感染者病程、评价抗病毒治疗效果的重要指标[3-4]。因此为了解新发现HIV/AIDS病例的免疫状况及疾病进展情况，本文通过对2014-2015年南京市610例新发现的HIV/AIDS病例外周血T淋巴细胞亚群进行检测并分析探讨其相关影响因素，现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料 选择南京市2014-2015年经HIV抗体确证为阳性并随访完成CD4+T淋巴细胞检测的病例共610例。
1.2 主要仪器与试剂 采用BD FACSCalibur流式细胞仪；MultiTEST四色免疫荧光试剂：MultiTEST CD3 FITC/CD8 PE/CD45 PerCP/CD4 APC Reagent；TruCOUNT 绝对计数管：含有已知数量的标准微球；FACS溶血素（10×）：用已过滤的双蒸水稀释至1×；鞘液；FACSCOMP优化条件标准微球：未标记的FITC、PE、PerCP、APC试剂，用于仪器配套质控，以上仪器和试剂均由美国BD公司生产。CD4全血质控品由美国Bectman公司生产。 1.3 方法 参照《全国艾滋病检测技术规范》（2009年版）和（2015年修订版）及《CD4+T淋巴细胞检测及质量保证指南》及仪器的操作规程的要求进行。
1.3.1 样品的采集与制备 用EDTA抗凝管采集外周静脉血5 mL，并于24 h内进行检测，CD4全血质控同标本一同进行操作。分别在TruCOUNT绝对计数管中加入10 μL四色免疫荧光试剂和50 μL颠倒混匀的全血，混匀后室温避光孵育15 min，在每管中加入1×FACS溶血素450 μL，混匀，室温避光孵育15 min，待检。
1.3.2 样品检测 样品上机检测前，需进行仪器质控，要求结果报告为“PASS”，再将制备好的全血样品上机，按照仪器操作规程检测T淋巴细胞亚群数值，并计算CD4+/CD8+T淋巴细胞的比值。每次检测都用全血质控来监测试验的重复性和准确性。
1.4 统计学方法 将样本检测结果录入Excel，使用SPSS 17.0统计软件进行独立样本t检验和方差分析。P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 基本情况 本次新发现HIV/AIDS病例并首次参加T淋巴细胞亚群检测的共610例，其中男563例，占92.3%，女47例，占7.7%；年龄12～91岁，平均（33.4±12.6）岁，中位年龄29岁，<30岁315例，占51.6%，30～59岁275例，占45.1%，≥60岁20例，占3.3%；经同性传播409例，占67.0%，异性传播126例，占20.7%，经注射毒品传播12例，占2.0%，其余不详。
2.2 首次CD4细胞检测结果 610例HIV/AIDS病例首次检测CD4细胞的绝对值范围为2～1897个/μL，平均（384±231）个/μL。其中CD4细胞<200个/μL的130例，占21.3%；200～349个/μL的154例，占25.2%；350～499个/μL的166例，占27.2%；≥500个/μL的160例，占26.2%。所有病例中CD4+/CD8+<1的病例有604例，占99.0%。
2.3 不同性别HIV/AIDS病例T淋巴细胞亚群结果 男性的CD3+T、CD4+T和CD8+T淋巴细胞的绝对计数均高于女性，且差异均有统计学意义（t=6.393、3.461、6.188，P<0.05），但女性CD4+/CD8+T淋巴细胞的比值却略高于男性，差异无统计学意义（t=-1.046，P=0.296>0.05）。见表1。
2.4 不同年龄段HIV/AIDS病例T淋巴细胞亚群结果 610例HIV/AIDS病例分为3个年龄段进行方差分析，CD3+T、CD4+T和CD8+T淋巴细胞的绝对计数比较，差异均有统计学意义（F=19.288、9.092、14.353，P<0.05），进一步进行多样本的两两比较发现年龄<30岁的CD3+T、CD4+T和CD8+T淋巴細胞绝对计数均高于另外两个年龄段，差异均有统计学意义（P<0.05）；而30～59岁的T淋巴细胞各亚群计数均高于≥60岁，差异均无统计学意义（PCD3=0.427，PCD4=0.528，PCD8=0.611）。三个年龄段CD4+/CD8+淋巴细胞的比值随着年龄增长呈递减趋势，但差异无统计学意义（F=0.187，P=0.829）。见表2。
2.5 不同传播途径HIV/AIDS病例T淋巴细胞亚群结果 不同传播途径的HIV/AIDS病例经方差分析，CD3+T、CD4+T和CD8+T淋巴细胞的绝对计数比较，差异均有统计学意义（F=5.869、3.327、4.798，P<0.05），进一步进行多样本的两两比较发现同性传播T淋巴细胞各亚群计数均高于异性传播，且差异均有统计学意义（P<0.05），除此以外不同传播途径的T淋巴细胞各亚群计数两两比较差异均无统计学意义（P>0.05）。且不同传播途径的CD4+/CD8+T淋巴细胞比值比较，差异均无统计学意义（F=0.657，P=0.579>0.05）。
3 讨论
T淋巴细胞亚群的测定是检测机体细胞免疫功能的重要指标，其中的CD4+T淋巴细胞亚群作为HIV病毒的主要靶细胞，已经成为HIV感染者病程、预测临床进展以及评价抗病毒治疗效果的重要指标[5-8]。HIV感染者血液中CD4细胞以每年25～40个/μL的幅度下降，如急转直下至200个/μL，则为疾病恶化先兆[9-10]。研究显示，本市新发现并已检测CD4的HIV/AIDS病例CD4细胞计数的平均值为（384±231）个/μL，这一数值略高于2010年全国新发现的HIV/AIDS病例首次CD4值（334±302）个/μL[11]。本市有21.3%的新发现病例CD4细胞<200个/μL，为长期感染者，极易发生机会性感染，虽然这一比例低于全国的33.1%[11]，但这部分病例发现较晚，一旦病情发生不可逆发展，即使开展抗病毒治疗，也可能对器官造成不可逆的损伤和破坏，降低患者生存质量，死亡率上升[12-13]。因此及时的诊断和CD4细胞水平评估将有效提高HIV感染者的生存质量[14]。
本调查发现男性HIV/AIDS病例T淋巴细胞亚群绝对计数均高于女性，且差异均有统计学意义（P<0.05），而文献[15]报道，在健康成年人群中男性T淋巴细胞亚群绝对计数虽略高于女性，但差异无统计学意义（P>0.05），这与本调查结果尽管并不完全一致，但变化趋势是一样的，因此推断这是生理性差异，目前并无研究表明这种变化趋势与HIV感染有关，而本次调查中CD4+/CD8+T淋巴细胞的比值在不同性别中并无统计学差异，更是证明了上述推断。
本次检测还发现随着年龄增长，T淋巴细胞亚群计数呈下降趋势，尤其是在30岁以下的年龄段，与30岁以上两个年龄段差异均有统计学意义（P<0.05），这与文献[16-17]报道相似。可能是由于随着年龄的增长，或者是感染时限的延长，机体的自身免疫力下降，导致免疫细胞破坏加剧，疾病的进展更快，因此要严密监控高龄组的T淋巴细胞亚群的变化情况[18-20]。 在此前的报道中，尚未发现不同传播途径对T淋巴细胞亚群的影响，而本研究发现同性传播的T淋巴细胞亚群显著性高于异性传播，这与之前报道不符，进一步分析数据发现同性传播病例占67.0%，异性传播只占20.7%，且异性传播中超过27.0%是女性，笔者推测病例分布的不均衡以及性别的因素均影响了结果，在下一次检测中增加并均衡标本兼测量来进一步观察不同传播途径对T淋巴细胞亚群计数的影响。
综上所述，新发现的HIV感染者并不一定是新发感染，今后的工作应加大早发现、早干预、早治疗的工作力度，加强管理，合理分配CD4检测能力，及时了解HIV/AIDS患者的免疫状况，并结合影响T淋巴细胞的因素，有针对性的开展抗病毒治疗，提高生存质量。
参考文献
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[2] Carré N，Boufassa F，Hubert J B，et al.Predictive value of viral load and other markers for progression to clinical AIDS after CD4+ cell count falls below 200/microL. SEROCO & HEMOCO Study Group[J].Int J Epidemiol，1998，27（5）：897-903.
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（收稿日期：2016-08-01） （本文编辑：程旭然）