【摘 要】
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目的 筛选合适的人白细胞介素-18(hlL-18)突变体,并检测其活性.方法 运用分子模建工具,模建出IL-18受体及IL-18/IL-18R复合物的分子结构,分别虚拟突变IL-18的4个半胱氨酸为另
【机 构】
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武汉生物制品研究所肿瘤研究室,武汉,430030
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目的 筛选合适的人白细胞介素-18(hlL-18)突变体,并检测其活性.方法 运用分子模建工具,模建出IL-18受体及IL-18/IL-18R复合物的分子结构,分别虚拟突变IL-18的4个半胱氨酸为另外19种氨基酸,以野生型IL-18为模板进行同源模建,建立其三维结构模型,计算其IL-18/IL-18R复合物三维结构及分子间作用能变化情况,筛选几种突变方案.运用分子生物学技术构建突变体,表达纯化后进行活性检测.结果 根据理论预测情况,筛选了12株突变体.突变的质粒经双酶切及测序鉴定,证明构建正确.突变体蛋白以包涵体形式表达,表达量约占菌体总蛋白的30%,纯化后纯度大于90%.纯化的C38Glu、C127Ser等几株突变体在低浓度时,活性轻微上升,与理论预测结果基本相同.结论 已成功构建了多株IL-18的突变体,运用生物信息学方法进行先期筛选有助于加快IL-18的突变研究.
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