纤连蛋白对人外周血单核细胞TLR4介导的脂多糖反应的影响

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目的研究纤连蛋白(Fn)刺激对人外周血单核细胞(PBMCs)炎症因子释放和Toll样受体4(TLR4)表达的影响。方法采用梯度离心法从浓缩人外周血白细胞中分离出PBMCs,设立空白对照组、Fn刺激组、LPS刺激组以及Fn+LPS复合刺激组,分别刺激PBMCs 0.5、2、4、8、12h后收集细胞培养上清,采用酶联免疫法(ELISA)检测其炎症因子人白介素6(IL-6)、人白介素10(IL-10)及肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平;采用Western blotting法检测各刺激物对TLR4表达的影响。结果 4、8h复合刺激组IL-6释放量分别为727.00±37.73和918.25±26.78pg/ml,明显高于同时间点其他3组(P<0.05);2h复合刺激组TNF-α释放量明显增加,且高于同时间其他3组(P<0.05);0.5、2、4h复合刺激组IL-10释放量呈缓慢递增,8、12h分别达784.74±91.96、1081.74±57.98pg/ml,与同时间其他3组比较明显增加(P<0.05)。Western blotting结果显示,1、2h复合刺激组TLR4的表达水平明显高于各时间点的其他3组(P<0.05)。结论单纯Fn或LPS刺激即可促进PMBCs TLR4表达上调,Fn复合LPS刺激可进一步增强TLR4的表达,并导致炎症介质IL-6、TNF-α释放的显著增加,提示Fn可增强PMBCs对LPS刺激的敏感性。
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