【摘 要】
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目的 探讨miR-153对肺腺癌细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响及其相关作用机制.方法 构建SRC-3\'UTR-WT和SRC-3\'UTR-MUT载体,分别与miR-153 mimic,mimic control共转染至肺腺癌A549细胞,采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-153与SRC的靶向关系.构建miR-153过表达、敲低miR-153和SRC表达的A549细胞系,采用Western Blot检测miR-153对SRC蛋白表达的影响.通过CCK-8法、细胞划痕实验、Transwell侵
【机 构】
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空军军医大学第二附属医院/唐都医院,西安 710038
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目的 探讨miR-153对肺腺癌细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响及其相关作用机制.方法 构建SRC-3\'UTR-WT和SRC-3\'UTR-MUT载体,分别与miR-153 mimic,mimic control共转染至肺腺癌A549细胞,采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-153与SRC的靶向关系.构建miR-153过表达、敲低miR-153和SRC表达的A549细胞系,采用Western Blot检测miR-153对SRC蛋白表达的影响.通过CCK-8法、细胞划痕实验、Transwell侵袭实验及流式细胞仪分别检测miR-153,SRC及miR-153+SRC共转染对A549细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响.结果 双荧光素酶报告基因实验证实SRC是miR-153的靶基因.25例临床肺腺癌组织中miR-153表达水平(13.251±4.256)较癌旁正常组织(25.312±6.527)显著降低(t=7.739,P<0.001),SRC表达水平(28.574±6.438)较癌旁正常组织(15.206±5.117)显著升高,差异有统计学意义(t=8.128,P<0.001).随着临床分期和病理学分级的增高,肺腺癌组织中miR-153表达逐渐降低(F=13.351,8.479,P<0.01),SRC表达逐渐升高(F=9.812,10.521,P<0.001),差异均有统计学意义.肺腺癌组织中miR-153与SRC表达呈显著负相关(r=-0.726,P<0.05).过表达miR-153显著抑制SRC蛋白表达(t=7.075,P=0.002),而降低miR-153表达得到与之相反的结果.过表达miR-153和敲低SRC蛋白表达显著抑制A549细胞的增殖(t=22.265,21.783,均P<0.001)、迁移(t=7.287,4.819,P=0.002,0.009)及侵袭(t=10.043,10.563,P=0.001,0.001),促进细胞凋亡(t=3.918,6.735,P=0.017,0.003);抑制miR-153表达则得到相反结果.共表达miR-153+SRC逆转了原本过表达miR-153对肺腺癌细胞增殖、迁移及凋亡的抑制/促进作用.结论 miR-153在肺腺癌中显著低表达,其通过靶向下调SRC的表达抑制肺腺癌细胞的增殖、侵袭、转移,促进细胞凋亡.
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