沉默维生素D受体的表达对大鼠气道平滑肌细胞增殖及核因子-κB活化的影响

• 作 者: 邹淑梅 郑曦 赖国祥 余宗阳 宋颖芳
• 机 构: 联勤保障部队第九〇〇医院 厦门大学附属东方医院 福建医科大学福总临床医学院呼吸内科，福州350025,联勤保障部队第九〇〇医院 厦门大学附属东方医院 福建医科大学福总临床医学院呼吸内科，福州35002
• 出 处: 中华结核和呼吸杂志
• 发表日期: 2021年44期
• 关键词: 维生素D受体 骨化三醇 肌细胞 肌 平滑 细胞增殖 核因子-κB

目的

研究沉默维生素D受体（VDR）基因表达对气道平滑肌细胞（ASMC）增殖能力的影响，并初步探讨核因子-κB（NF-κB）在其中的作用。

方法

构建特异性靶向大鼠VDR基因的RNA干扰慢病毒载体。实验分组为空白组、空载体组和干扰组。嘌呤霉素抗性筛选后建立VDR基因稳定沉默的大鼠ASMC细胞株。四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测细胞增殖；流式细胞仪检测细胞生长周期；免疫荧光双标染色法检测 NF-κB p65的核易位情况；双荧光素酶报告基因法检测NF-κB依赖的转录活性，Western blotting法检测IκBα及p-IκBα蛋白的表达水平；放线菌素D处理细胞，检测IκBα mRNA的稳定性。利用SPSS 23.0统计软件，采用多组间单因素方差（One-Way ANOVA）分析； 组间两两比较采用SNK检验。

结果

（1）与空白组与空载体组相比，干扰组ASMC的A_{492 nm}值及G₂/M期细胞比例显著高（P<0. 05），而G_0/1细胞比例明显低（P<0.05）。（2）干扰组ASMC中NF-κB亚单位p65发生明显核易位；其NF-κB报告基因的相对表达量（1.37±0.28）较空白组（1.00±0.19，P=0.031）及空载体组（0.96±0.18，P=0.027）明显高。（3）干扰组中IκBα的蛋白表达量（0.13±0.04）显著低于空白组（0.29±0.05，P=0.023）及空载体组（0.32±0.07，P=0.014）。相反，干扰组p-IκBα/IκBα为（0.86±0.04），显著高于空白组（0.41±0.07，P=0.026）及空载体组（0.37±0.05，P= 0.017）。（4）干扰组ASMC的IκBα mRNA半衰期（171.31±9.67） min，较空白组［（224.69±7.95） min，P=0.032］及空载体组［（230.41±6.37） min，P=0.035］明显短。

结论

沉默VDR的表达能促进ASMC的细胞增殖，这一作用与其活化ASMC中的NF-κB信号通路有关。