Touchdown PCR扩增多样性小鼠Fab抗体基因

• 作 者: 王乃东 何浪 薛立群
• 机 构: 湖南农业大学动物医学院
• 出 处: 中国农学通报
• 发表日期: 2010年23期
• 关键词: 小鼠 噬菌体展示技术 抗体库 mouse phage display technology antibody library
• 基金项目: 国家自然科学基金“应用鼠源性高亲和力噬菌体Fab抗体筛选和克隆新的血清学H-Y抗原基因”（30901090/C120209）, 湖南省教育厅科学研究优秀青年项目“利用高亲和力噬菌体抗体筛选血清学H-Y抗原”（09B046）

为了扩增多样性Fab抗体基因产物,保证噬菌体抗体库的足够库容。分离C57BL/6鼠的脾脏,并制备脾细胞悬液,提取其总RNA,逆转录为cDNA,利用普通PCR和Touch down（TD）PCR扩增鼠Fab基因产物,通过琼脂糖凝胶电泳验证PCR产物,比较分析2种方法的扩增效果。结果显示：轻链和重链Fd基因的PCR产物大小约为680bp,与理论值相符。电泳结果显示,TD-PCR获得8个重链Fd基因和6个轻链基因条带,普通PCR获得7个重链Fd基因和5个轻链基因条带。在普通PCR产物中,轻链基因引物VkB未能扩