【摘 要】
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在真核生物中,HORMA结构域具高度保守性,含HORMA结构的蛋白在细胞减数分裂中具有重要作用.LOC_Os01g07170蛋白具有HORMA结构域,系统进化树分析表明该蛋白与拟南芥ASY1相似度
【机 构】
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上海交通大学生命科学技术学院,上海,200240
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在真核生物中,HORMA结构域具高度保守性,含HORMA结构的蛋白在细胞减数分裂中具有重要作用.LOC_Os01g07170蛋白具有HORMA结构域,系统进化树分析表明该蛋白与拟南芥ASY1相似度较高,且该基因在生殖器官大量表达,推测LOC_OsO1g07170基因可能参与细胞的减数分裂.本研究利用CRISPR-Cas9技术对LOC_OsO1g07170基因进行敲除,在该基因上设计了两个靶位点,构建LOC_OsO1g07170基因敲除载体,采用农杆菌介导的方法转化水稻粳稻品种9522,获得T0代转基因苗.结果显示突变靶点1处共获得7棵转基因苗,鉴定得到3株纯合突变体,突变类型为在第3个外显子的第1 137号碱基缺失1个C碱基;突变靶点2处共获得11株转基因苗,有4株纯合突变体,突变类型为在第4个外显子的第1 501号碱基处插入1个C碱基.分析氨基酸序列,发现这2种突变株系都存在移码突变而使氨基酸翻译提前终止.本研究成功利用CRISPR-Cas9基因编辑技术获得了水稻Loc_os01g0770基因的两个突变类型的株系,为进一步研究LOC_Os01 g07170基因功能提供了遗传材料.
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