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目的探讨酶联免疫吸附试验（ELISA）两步法检测乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）的影响因素。方法分别在稀释液的量、洗板时机、孵育时间、显色时间等不同条件下对阳性混合血清、阴性混合血清和弱阳性对照血清进行检测。结果使用滴瓶滴加1滴稀释液、不加入稀释液、加入血清后温育时间缩短为45min、加入酶结合物后孵育时间缩短为15min、加入显色剂后显色时间缩短为15min,弱阳性结果较标准方法差异有统计学意义;加入样本孵育1h后洗板,阳性、弱阳性和阴性结果均较标准方法差异有统计学意义。结论 ELISA条件的改变,就