【摘 要】
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目的 制备重组美洲钩虫Ascris型蛋白酶抑制剂1(rNaTIL-1),并观察其抗凝血活性及抑制丝氨酸蛋白酶作用.方法 从美洲钩虫成虫cDNA中扩增获得NaTIL-1编码基因,连接入原核表达质
【机 构】
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广东医科大学寄生虫学教研室,广东湛江524023
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目的 制备重组美洲钩虫Ascris型蛋白酶抑制剂1(rNaTIL-1),并观察其抗凝血活性及抑制丝氨酸蛋白酶作用.方法 从美洲钩虫成虫cDNA中扩增获得NaTIL-1编码基因,连接入原核表达质粒pET32a-sumo后转入到大肠埃希菌BL21(DE3)中,用IPTG诱导表达,重组产物经Ni-NTA亲和层析纯化,纯化柱上用SUMO蛋白酶切割融合伴侣后获得rNaTIL-1.用凝血时间法检测rNaTIL-1的抗凝活性,用发色底物法检测rNaTIL-1对丝氨酸蛋白酶的抑制作用.结果 成功构建了原核表达质粒pET32a-sumo/NaTIL-1,在E.coli BL21(DE3)中表达产物大部分可溶,并纯化获得了 rNaTIL-1.rNaTIL-1对血浆凝血酶原时间和活化部分凝血活酶时间均无明显影响.在100倍摩尔比的过量浓度下,rNaTIL-1对人胰凝乳蛋白酶、糜酶、纤溶酶、血浆激肽释放酶和猪胰蛋白酶、胰弹性蛋白酶均无明显抑制作用,但能抑制(91.6±0.9)％的人中性粒细胞弹性蛋白酶(HNE)活性.rNaTIL-1抑制HNE的IC50值约为(325.50±1.05)nmol/L,Ki值约为(0.34±0.04)μmol/L.结论 NaTIL-1无抗凝血活性,但具有较强的抑制HNE活性,可能在美洲钩虫参与调控宿主炎症反应和逃避宿主免疫中发挥作用.
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原发性肝癌(肝癌)是肝移植主要适应证之一,但术后肝癌复发严重影响肝移植的长期疗效。程序性细胞死亡蛋白1(PD-1)是一种免疫抑制分子,PD-1/程序性细胞死亡蛋白配体1(PD-L1)信号通路的激活在移植物免疫耐受中发挥重要作用。近年来,以PD-1/PD-L1抑制剂为代表的免疫检查点抑制剂已成为治疗晚期肝癌病人的有效手段之一,但能否用于肝移植受者仍存在较大的争议,其有效性和安全性仍有待研究。本文对PD-1/PD-L1在移植肝组织的表达、PD-1/PD-L1诱导移植免疫耐受的机制以及PD-1/PD-L1抑制剂
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