【摘 要】
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目的 探究阿奇霉素(AZM)对H2O2诱导的小鼠胚胎成纤维细胞系(NIH/3T3)衰老模型的效果及相关机制.方法 采用H2O2处理NIH/3T3细胞,构建细胞衰老模型,利用ELISA检测相关标志物水
【机 构】
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成都医学院基础医学院,四川省老年医学临床医学研究中心,石河子大学
【基金项目】
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国家自然科学基金项目(81560566),四川省科技厅项目(2017JY0150,2018054),四川省教育厅项目(17ZA0113),发育与再生四川省重点实验室基金项目(SYS15-004,SYS15-008),成都医学院第一附属医院专项科研基金(CYFY2017YB01)。
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目的 探究阿奇霉素(AZM)对H2O2诱导的小鼠胚胎成纤维细胞系(NIH/3T3)衰老模型的效果及相关机制.方法 采用H2O2处理NIH/3T3细胞,构建细胞衰老模型,利用ELISA检测相关标志物水平,分析衰老相关的β-半乳糖苷酶(SA-β-GAL)活性以检测模型的相关表型;运用West-ern blot检测其衰老相关分泌表型(SASP)的蛋白标志物表达水平,qPCR分析其相关mRNA水平;使用AZM处理正常细胞及衰老细胞,并运用流式细胞术、TUNEL、Western blot等检测AZM作用下相关表型并验证相关表型的标志物.结果 H2O2处理后的NIH/3T3细胞核体积变大;β-半乳糖苷酶染色蓝染比率升高(P＜0.05);衰老相关细胞炎性因子IL-6、IL-8/CXCL8分泌量显著上升(P＜0.05);衰老标志性蛋白P53、P21、P16水平均显著升高(P＜0.05),同时mRNA呈相同趋势(P＜0.05).衰老细胞在使用不同浓度AZM处理后,发生凋亡,并具有浓度依赖性.使用AZM处理不同实验组细胞24 h后,West-ern blot结果显示衰老细胞cleaved PARP/PARP、Bax上调、Bcl-2下调(P＜0.05);经Annexin V-PE/7-AAD双染,Annexin V阳性比率上升(P＜0.05);正常细胞在AZM的处理下凋亡比例未见明显差异(P＞0.05);TUNEL实验结果与上述一致.结论 AZM可能特异性诱导衰老细胞凋亡,为临床上抗衰老药物的选择与应用提供了新的策略.
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