人巨细胞病毒UL138含多个B细胞表位病毒样颗粒的构建及鉴定

• 作 者: 李宝青 田晓娟 陈晓晴 王红 陶洪群 郑育 沈贤 李文姝 张丽芳 薛向阳
• 机 构: 325000 温州医科大学附属第二医院,温州医科大学微生物学和免疫学教研室，分子病毒与疫苗研究所，热带医学研究所,325000 温州医科大学附属第二医院,325000 温州医科大学附属第二医院,325
• 出 处: 中华实验和临床病毒学杂志
• 发表日期: 2015年29期
• 关键词: 人巨细胞病毒 病毒样颗粒 疫苗

目的

利用毕赤酵母系统表达HPV16 L1-HCMV UL138含多个B细胞表位片段的嵌合病毒样颗粒，并评价其免疫效应。

方法

选择富含B细胞表位的HCMV UL138_96-138片段，构建毕赤酵母真核表达质粒pPIC3.5K/HPV16L1/UL138_96-138。线性化后的重组质粒电转化GS115毕赤酵母，甲醇诱导HPV16 L1/UL138_96-138蛋白表达，采用肝素亲和层析法纯化嵌合VLPs，并加以鉴定。将纯化的嵌合VLPs免疫BALB/c小鼠，通过ELISA检测免疫小鼠血清的UL138特异性抗体水平。

结果

经PCR、酶切和测序分析表明成功构建了pPIC3.5K/HPV16 L1/UL138_96-138嵌合重组质粒。经甲醇诱导后，SDS-PAGE和Western Blot证实重组酵母菌裂解产物存在目的蛋白。肝素亲和纯化后，透射电镜观察到了直径大约55nm的病毒样颗粒。免疫小鼠血清的ELISA结果显示，HPV16 L1-HCMV UL138 B细胞表位嵌合病毒样颗粒能诱导小鼠产生较高水平的UL138特异性IgG抗体。

结论

以HPV16 L1为载体，利用整合型重组毕赤酵母表达系统成功制备了HCMV UL138含多个B表位片段的嵌合病毒样颗粒，免疫小鼠可产生较高水平的体液免疫反应。