【摘 要】
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目的 外界环境因素会对霍乱弧菌的毒力表达产生影响,AphB作为霍乱弧菌毒力调控网络中的关键因子,受氧压抑制作用明显.本实验旨在研究氧压抑制AphB活性的关键位点及机制. 方法
【机 构】
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承德医学院,病原生物学教研室,河北承德067000;南京农业大学
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目的 外界环境因素会对霍乱弧菌的毒力表达产生影响,AphB作为霍乱弧菌毒力调控网络中的关键因子,受氧压抑制作用明显.本实验旨在研究氧压抑制AphB活性的关键位点及机制. 方法 利用诱变菌株XL1 Red对aphB基因进行随机突变,获得突变子文库;将受到AphB调控的tcpP基因的启动子区域与lux报告基因相融合,获得检测用报告质粒;取含有aphB突变基因及报告质粒的菌株在有氧条件下进行培养,通过检测Lux值筛选目标突变株;利用细菌双杂交系统,进一步研究筛选到的突变位点感受氧压的机制. 结果 筛选到的突变株S267L、M113I和M244I在有氧条件下均表现出高转录调控活性,分别是WT(野生型)的22.8、173.3、30.2倍(P＜0.001).霍乱弧菌验证S267L、M113I是WT的8.2、13.3倍,M244I是WT的14.8倍(P＜0.01).细菌双杂交实验结果表明M113I通过改变蛋白聚合能力从而抵抗氧压的抑制作用. 结论 S267、M113和M244为氧压抑制AphB活性的关键位点.
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