【摘 要】
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目的：探讨环状RNA hsa＿circ＿0009735在胃癌组织和细胞中的表达，阐明其对胃癌细胞上皮间质转化（EMT）、迁移、细胞周期和自噬的影响。方法：取正常胃黏膜GES-1细胞、胃癌MGC-803细胞、 MKN-45细胞和HGC-27细胞。将hsa＿circ＿0009735小干扰RNA和阴性对照转染MGC-803细胞，将胃癌MGC-803细胞分为si-hsa＿circ＿0009735组和阴性对
【机 构】
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江苏大学医学院检验医学研究所微生物学及检验教研室
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目（81772157）； 江苏省教育厅江苏省研究生科研创新计划项目（KYCX20＿3049）；
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目的：探讨环状RNA hsa＿circ＿0009735在胃癌组织和细胞中的表达，阐明其对胃癌细胞上皮间质转化（EMT）、迁移、细胞周期和自噬的影响。方法：取正常胃黏膜GES-1细胞、胃癌MGC-803细胞、 MKN-45细胞和HGC-27细胞。将hsa＿circ＿0009735小干扰RNA和阴性对照转染MGC-803细胞，将胃癌MGC-803细胞分为si-hsa＿circ＿0009735组和阴性对照组；将对照质粒和hsa＿circ＿0009735过表达质粒转染入HGC-27细胞，将胃癌HGC-27细胞分为OE-hsa＿circ＿0009735组和对照质粒组；MGC-803细胞转染细胞自噬质粒pcDNA-eGFP-LC3后分为空白组和不同浓度(0.25、0.50、1.00和2.00 mg·L-1)雷帕霉素组。实时荧光定量PCR （RT-qPCR）法检测胃癌组织和细胞中hsa＿circ＿0009735表达水平，激光共聚焦显微镜观察各组MGC-803细胞形态表现和细胞中自噬小体数，Transwell小室实验检测各组迁移细胞数，流式细胞术检测不同细胞周期各组细胞百分率，Western blotting法检测各组细胞中微管相关蛋白轻链3Ⅱ（LC3Ⅱ）、微管相关蛋白轻链3Ⅰ（LC3Ⅰ）、E-钙黏蛋白、Cyclin D1、Vimentin和N-钙黏蛋白表达水平。结果：PCR产物经测序发现存在环化位点，与hsa＿circ＿0009735序列匹配。与癌旁组织比较，胃癌组织中hsa＿circ＿0009735表达水平升高（P＜0.05）；与GES-1细胞比较，MGC-803细胞中hsa＿circ＿0009735表达水平升高（P＜0.05）。与空白组比较，0.25和0.50 mg·L-1雷帕霉素组MGC-803细胞形态无明显改变，1.00 mg·L-1雷帕霉素组MGC-803细胞中颗粒增多，边界不清；2.00 mg·L-1雷帕霉素组死亡MGC-803细胞较多。激光共聚焦显微镜下1.00 mg·L-1雷帕霉素组MGC-803细胞中自噬小体数与2.00 mg·L-1雷帕霉素组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。与空白组比较，不同浓度雷帕霉素组MGC-803细胞中LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高（P＜0.05）,hsa＿circ＿0009735表达水平降低（P＜0.01）。与阴性对照组比较，si-hsa＿circ＿0009735组MGC-803细胞中hsa＿circ＿0009735表达水平降低（P＜0.01）,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高（P＜0.01），迁移细胞数减少（P＜0.01）,G1期细胞百分率升高（P＜0.05）,S期细胞百分率降低（P＜0.01）,G2期细胞百分率降低（P＜0.05），细胞中Cyclin D1、Vimentin和N-钙黏蛋白表达水平均降低（P＜0.05）；与对照质粒组比较，OE-hsa＿circ-0009735组HGC-27细胞中hsa＿circ＿0009735表达水平明显升高（P＜0.01）,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值降低（P＜0.01），迁移细胞数减少（P＜0.01）,G1期细胞百分率降低（P＜0.01）,S期细胞百分率升高（P＜0.05）,G2期细胞百分率升高（P＜0.05）,E-钙黏蛋白表达水平降低（P＜0.05）, Cyclin D1、 Vimentin和N-钙黏蛋白表达水平均升高（P＜0.05）。结论：胃癌细胞中高表达hsa＿circ＿0009735可能促进EMT进程，影响细胞迁移和细胞周期，并抑制细胞自噬过程。
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