【摘 要】
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目的 体外实验研究腺病毒介导Wnt10b基因表达与抑制对人BMSCs (human BMSCs,hBMSCs)成骨成脂分化的调控. 方法 取健康成人髂骨骨髓分离培养hBMSCs,取第4代细胞并分为4组:A、B
【机 构】
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四川大学华西医院骨科 成都,610041
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目的 体外实验研究腺病毒介导Wnt10b基因表达与抑制对人BMSCs (human BMSCs,hBMSCs)成骨成脂分化的调控. 方法 取健康成人髂骨骨髓分离培养hBMSCs,取第4代细胞并分为4组:A、B、C组分别加入Wnt10b基因表达腺病毒载体、Wnt10b基因沉默(Wnt 10b-shRNA)腺病毒载体和空病毒转染细胞,D组细胞不进行转染作为空白对照组.各组进行成骨、成脂和无诱导培养,通过ALP染色、茜素红染色和油红O染色检测Wnt10b对各组成骨成脂分化的影响,通过实时荧光定量PCR检测成骨和成脂相关基因表达,Western blot检测成骨和成脂相关蛋白表达,了解Wnt10b对hBMSCs成骨成脂转录和蛋白水平的影响. 结果 成骨诱导培养后ALP染色4组均呈阳性,A组呈强阳性,B组染色最弱;茜素红染色A组出现大量片状融合褐色矿化结节,B组见少许点状褐色矿化结节,C、D组出现大量点状褐色矿化结节.成脂诱导培养后油红O染色B、C、D组呈强阳性表现,其中B组最强;A组散在小团状着色区,数量较其他组明显减少.荧光定量PCR和Western blot结果示:A组成骨转录因子和蛋白表达高于B、C、D组,B组低于C、D组;而成脂转录因子和蛋白表达与成骨转录因子及蛋白表达情况相反. 结论 Wnt10b基因高表达促进hBMSCs向成骨分化,低表达则促进成脂分化.
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