探讨X染色体骨髓酪氨酸激酶(BMX)在LPS诱导小鼠单核巨噬细胞产生TNF－α和IL－1β中的作用及相关机制。
方法将RAW264.7小鼠单核巨噬细胞接种于6孔板中，常规培养，用于以下实验。(1)取细胞，按随机数字表法分为空白对照组、LPS对照组及75、750、7 500、75 000 nmol/L BMX－IN－1预处理组，每组8孔。空白对照组细胞常规培养25 h；LPS对照组细胞常规培养24 h后，用终质量浓度(下同)为0.1 μg/mL LPS刺激1 h；后4组细胞分别用终物质的量浓度(下同)为75、750、7 500、75 000 nmol/L的BMX－IN－1处理24 h后，用0.1 μg/mL LPS刺激1 h。实时荧光定量RT－PCR法检测各组细胞中TNF－α mRNA表达量，筛选BMX－IN－1最佳作用浓度。(2)取细胞，按随机数字表法分为LPS对照组及BMX－IN－1预处理2、4、8、12、18 h组，每组8孔。LPS对照组细胞用0.1 μg/mL LPS刺激1 h；后5组细胞用最佳作用浓度的BMX－IN－1分别处理2、4、8、12、18 h后，用0.1 μg/mL LPS刺激1 h。实时荧光定量RT－PCR法检测各组细胞中TNF－α mRNA表达量，筛选BMX－IN－1最佳作用时间。(3)取细胞，按随机数字表法分为空白对照组、BMX－IN－1对照组、LPS对照组和BMX－IN－1＋LPS组，每组16孔。空白对照组细胞常规培养最佳作用时间加1 h；BMX－IN－1对照组细胞用最佳作用浓度BMX－IN－1处理最佳作用时间后，常规培养1 h；LPS对照组细胞常规培养最佳作用时间后，用0.1 μg/mL LPS刺激1 h；BMX－IN－1＋LPS组细胞用最佳作用浓度BMX－IN－1处理最佳作用时间后，用0.1 μg/mL LPS刺激1 h。采用实时荧光定量RT－PCR法检测各组细胞中TNF－α和IL－1β mRNA表达量，蛋白质印迹法检测各组细胞中BMX和p38MAPK活性，样本数均为8。对数据行单因素方差分析和LSD检验。
结果(1)与空白对照组比较，其余5组细胞中TNF－α mRNA表达量显著增高(P值均小于0.01)。与LPS对照组比较，各BMX－IN－1预处理组细胞中TNF－α mRNA表达量均下降，但仅75 000 nmol/L BMX－IN－1预处理组细胞中TNF－α mRNA表达量显著降低(P<0.05)。BMX－IN－1最佳作用浓度为75 000 nmol/L。(2)与LPS对照组比较，BMX－IN－1预处理2、4 h组细胞中TNF－α mRNA表达量无明显变化(P值均大于0.05)，BMX－IN－1预处理8、12、18 h组细胞中TNF－α mRNA表达量显著降低(P<0.05或P<0.01)。其中，BMX－IN－1预处理12 h组细胞中TNF－α mRNA表达量最低。BMX－IN－1最佳作用时间为12 h。(3)BMX－IN－1对照组细胞中TNF－α和IL－1β mRNA表达量分别为0.97±0.13、0.98±0.06，与空白对照组的1.00相近(P值均大于0.05)。LPS对照组细胞中TNF－α和IL－1β mRNA表达量分别为2.97±0.17和3.07±0.60，BMX－IN－1＋LPS组细胞中TNF－α和IL－1β mRNA表达量分别为2.31±0.94和2.55±0.73，均显著高于空白对照组(P值均小于0.01)。BMX－IN－1＋LPS组细胞中TNF－α和IL－1β mRNA表达量明显低于LPS对照组(P值均小于0.05)。BMX－IN－1对照组细胞中BMX和p38MAPK活性分别为0.95±0.19和0.98±0.18，均与空白对照组的1.00±0.14和1.00±0.22相近(P值均大于0.05)；LPS对照组细胞中BMX和p38MAPK活性分别为1.98±0.33和2.05±0.34，均显著高于空白对照组(P值均小于0.01)。BMX－IN－1＋LPS组细胞中BMX和p38MAPK活性分别为1.00±0.17和1.67±0.27，明显低于LPS对照组(P<0.05或P<0.01)。
结论BMX可促进LPS诱导小鼠单核巨噬细胞促炎性细胞因子TNF－α和IL－1β的产生，该作用可能与BMX活化p38MAPK途径有关。