【摘 要】
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目的研究ATP耗竭再恢复诱导的肾小管上皮细胞凋亡中,半胱氨酸天冬氨酸(caspase)3激活介导bcl-2降解的作用。方法使用代谢抑制剂短暂阻断细胞内ATP的生成,诱导细胞凋亡。以Hoe
【机 构】
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中山大学附属第一医院肾内科,中山大学附属第一医院肾内科,中山大学附属第一医院肾内科,Renal Section,Department of Medicine, Boston Medical Cente
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目的研究ATP耗竭再恢复诱导的肾小管上皮细胞凋亡中,半胱氨酸天冬氨酸(caspase)3激活介导bcl-2降解的作用。方法使用代谢抑制剂短暂阻断细胞内ATP的生成,诱导细胞凋亡。以Hoechst 33342染色观察凋亡细胞。应用编码人bcl-2 RNA的腺病毒感染细胞,使bcl-2在细胞内高表达。应用流式细胞仪,分析细胞凋亡和坏死的发生情况。以Western印迹检测caspase 3的活化以及bcl-2和bcl-2的降解产物。体外实验观察caspase 3和caspase 3特异性抑制剂DEVD对bcl-2降解产物的影响。结果高表达bcl-2组与对照组比较,细胞ATP耗竭60 min、90 min、120 min和再恢复60 min后,可减少细胞凋亡50%,P<0.05。肾小管上皮细胞ATP耗竭时,caspase 3被激活,bcl-2出现降解;细胞内ATP恢复时,bcl-2降解产物继续增多,并出现细胞凋亡。体外应用caspase 3可使bcl-2降解,而caspase3的特异性抑制剂DEVD能明显抑制caspase 3对bcl-2的降解。结论肾小管上皮细胞ATP耗竭再恢复时,caspase 3激活及其介导的bcl-2降解在细胞凋亡中发挥重要作用。
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