EV71检测细胞系的构建与鉴定

• 作 者: 闫江泓 吕新军 陶晓燕 于鹏程 吴未辰 李淑英 朱武洋
• 机 构: 063000 唐山，华北理工大学基础医学院，河北省慢性疾病重点实验室，唐山市慢性病临床基础研究重点实验室,100052 北京，中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所,100052 北京，中国疾病预防控制
• 出 处: 中华实验和临床病毒学杂志
• 发表日期: 2016年30期
• 关键词: 肠道病毒属 工程细胞系

目的

构建71型肠道病毒 (enterovirus 71, EV71)检测细胞系。

方法

以含有绿色荧光蛋白(green fluorescent protein, GFP)基因的EV71感染性克隆pWSK-T7-EV71-GFP为分子基础，构建GFP基因嵌入病毒基因组两端非编码区的表达盒UGFP，并将其克隆入质粒pLV-Puro获得慢病毒表达载体pLV-UGFP。将质粒pLV-UGFP和包装质粒Helper用脂质体转染法共转染入HEK293T细胞中，转染48 h后，用收集到的慢病毒颗粒感染BHK-21细胞，经嘌呤霉素压力筛选和系列稀释法获得用于外源EV71检测的工程细胞系BHK/UGFP。

结果

BHK/UGFP细胞感染EV71 48 h后，可检测到GFP的表达，作为对照组细胞感染甲病毒属的辛德毕斯病毒(XJ-160)和黄病毒属的乙脑病毒(P3)等单股正链RNA病毒，则检测不到绿色荧光。该检测细胞系用不同滴度的EV71感染，至少可以检测到10 PFU/ml的EV71。

结论

构建的BHK/UGFP检测细胞系可用于外源EV71的检测，且该检测方法特异性和灵敏性均良好。