【摘 要】
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目的构建大鼠干扰素诱导蛋白-10(IP-10)基因的真核表达质粒,并研究其在NIH 3T3细胞中的表达情况.方法通过PCR获得实验所需的IP-10基因片段,通过酶切IP-10基因片段、真核表达
【机 构】
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四川大学华西基础医学与法医学院,四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室
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目的构建大鼠干扰素诱导蛋白-10(IP-10)基因的真核表达质粒,并研究其在NIH 3T3细胞中的表达情况.方法通过PCR获得实验所需的IP-10基因片段,通过酶切IP-10基因片段、真核表达质粒载体pEGFP-c1和连接反应,构建IP-10的真核表达质粒pEGFP-c1-IP-10,重组质粒经限制性内切酶、PCR及DNA序列测定证实构建成功后,用PolyFect脂质体转染NIH 3T3细胞,然后用免疫荧光技术检测pEGFP-c1-IP-10在NIH 3T3细胞中的表达.结果酶切分析、PCR及DNA序列测定证实,IP-10基因片段被成功克隆入真核表达质粒载体pEGFP-c1,免疫荧光技术检测证实,该基因能在NIH 3T3细胞中表达.结论证实IP-10基因可在NIH 3T3细胞中表达,为将其作为DNA疫苗治疗自身免疫性疾病的研究奠定了基础.
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