猪α-1，3-半乳糖转移酶基因打靶载体的构建

• 作 者: 常宏宇 宫锋 季守平 鲍国强 李素波 章扬培 李芳 聂亚玲
• 机 构: 第二炮兵总医院儿科,军事医学科学院野战输血研究所
• 出 处: 生物技术通讯
• 发表日期: 2010年2期
• 关键词: α-Gal表位 猪α-1 3-半乳糖转移酶 基因打靶 异种移植 α-Gal epitope porcine α-1 3-galactosyltransferas
• 基金项目: 国家重点基础研究发展计划（2002CB713804）

目的：构建猪α-1，3-半乳糖转移酶（GGTA1）基因的正负筛选打靶载体。方法：以原代猪胚胎成纤维细胞基因组DNA为模板，采用长程PCR方法扩增出GGTA1基因的2条片段；以长约2kb包含部分第9外显子的片段为同源短臂，在XbaI和ClaI位点插入pLoxP质粒正筛选标记neo基因的3’端；以长约5．4kb包括部分第8外显子、全部第8内含子及部分第9外显子的片段为同源长臂，于NotI位点插入该质粒中聊D基因的5’端；2．7kb的负筛选标记船基因位于载体中同源短臂的3’端外侧。结果与结论：酶切、PCR及测序